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黎亚丽

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[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么？比如：每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？

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1楼 2010-07-26 18:33:06

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黎亚丽

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nihao

★ ★ ★
看天(金币+3):呵呵还是自己找了... 2010-07-28 09:35:22

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 18:51:29:
我说的实验原理包括跑PAGE，包括怎么获取蛋白质

有人这么说：菌体需要先用适量的水或者pbs缓冲液重悬，然后加入等体积的2xloading buffer，loadingbuffer中会包含有sds，甘油，指示剂和还原剂；
煮沸的作用是使菌体裂解，蛋白与sds，还原剂等充分作用，这样子，蛋白的二级结构，二硫键等都就会被打破，蛋白与sds结合而带负电荷，且带负电荷的比率与蛋白大小的相关，这样蛋白在电泳过程中依照大小而分离达到预想中的分离效果。

我认为：菌体悬浮于2倍的SDS-PAGE缓冲液（Tric-HCLPH6.7..SDS..甘油。。巯基乙醇），一是使蛋白质变性，一是为了使形成的包涵体可以再折叠，重新溶解。因为包涵体可以溶于缓冲液中。煮沸是变性后的复性过程。

我又一个问题我表达的蛋白会不会在这个过程变性，而不能复性了呢？