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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？
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zhangwuhui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-27 17:33:14:

那可以试试用自己设计的引物，就是目的片段两端的引物进行PCR，看能不能得到目的片段？

[ Last edited by zgw1016 on 2010-10-27 at 17:34 ]

该生物某基因的序列未知，所以无法设计自己的引物。
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21楼2010-10-27 17:55:32
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zgw1016

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangwuhui at 2010-10-27 17:55:32:

该生物某基因的序列未知，所以无法设计自己的引物。

那cDNA模板PCR的时候，用的什么引物捏？我设计简并引物来对cDNA进行PCR，到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物，阳性的一般都能P出来的！
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22楼2010-10-29 13:07:56
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蓝天白云haha

银虫 (正式写手)
引物的非特异性不够？
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23楼2010-10-29 14:35:19
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zhangwuhui

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-29 13:07:56:

那cDNA模板PCR的时候，用的什么引物捏？我设计简并引物来对cDNA进行PCR，到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物，阳性的一般都能P出来的！

这个没试过 ，可以试试的。
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24楼2010-11-02 22:15:23
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sai00fuji

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-29 13:07:56:

那cDNA模板PCR的时候，用的什么引物捏？我设计简并引物来对cDNA进行PCR，到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物，阳性的一般都能P出来的！

能P出来
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25楼2010-11-04 15:13:00
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sunwei57

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
常发生的情况,不必找原因,重新连接转化
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26楼2012-03-18 21:30:53
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frankstone

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
10个样品都出问题的话，应该是cDNA污染了，或者说提取的是肠道细菌的基因，由于和寄主的共生关系，能扩展相似的片段也有可能。
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做最好的自己。
27楼2012-06-26 19:53:06
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到过这样的问题，检测的时候加上载体的199bp一共500bp的样子，但是测序回来又1000多nt，比对也说是vector，很纠结
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28楼2013-06-07 15:41:36
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