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zhangwuhui

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-27 17:33:14:

那可以试试用自己设计的引物,就是目的片段两端的引物进行PCR,看能不能得到目的片段?

[ Last edited by zgw1016 on 2010-10-27 at 17:34 ]

该生物某基因的序列未知,所以无法设计自己的引物。
21楼2010-10-27 17:55:32
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zgw1016

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhangwuhui at 2010-10-27 17:55:32:

该生物某基因的序列未知,所以无法设计自己的引物。

那cDNA模板PCR的时候,用的什么引物捏?我设计简并引物来对cDNA进行PCR,到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物,阳性的一般都能P出来的!
22楼2010-10-29 13:07:56
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蓝天白云haha

银虫 (正式写手)

引物的非特异性不够?
23楼2010-10-29 14:35:19
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zhangwuhui

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-29 13:07:56:

那cDNA模板PCR的时候,用的什么引物捏?我设计简并引物来对cDNA进行PCR,到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物,阳性的一般都能P出来的!

这个没试过 ,可以试试的。
24楼2010-11-02 22:15:23
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sai00fuji

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zgw1016 at 2010-10-29 13:07:56:

那cDNA模板PCR的时候,用的什么引物捏?我设计简并引物来对cDNA进行PCR,到最后菌落PCR的时候还是用的简并引物,阳性的一般都能P出来的!

能P出来
25楼2010-11-04 15:13:00
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sunwei57

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
常发生的情况,不必找原因,重新连接转化
26楼2012-03-18 21:30:53
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frankstone

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
10个样品都出问题的话,应该是cDNA污染了,或者说提取的是肠道细菌的基因,由于和寄主的共生关系,能扩展相似的片段也有可能。
做最好的自己。
27楼2012-06-26 19:53:06
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饿的神啊

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到过这样的问题,检测的时候加上载体的199bp一共500bp的样子,但是测序回来又1000多nt,比对也说是vector,很纠结
28楼2013-06-07 15:41:36
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