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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

silicare:什么是很乱,可以发图看看 2010-09-13 12:12:31
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Originally posted by zhyzx at 2010-09-11 19:25:08:
如果是克隆基因的话,建议你先连T载体,鉴定正确了,再切下来连目的载体

我就是连的T载体,酶切出来就是很乱
21楼2010-09-13 09:50:52
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zhyzx

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2010-09-13 09:50:52:

我就是连的T载体,酶切出来就是很乱

好像没怎么遇到这种情况,多做几次试试
22楼2010-09-13 09:57:17
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biotech113

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人觉得,你说重组质粒提出来后酶切没切出目的基因片段,感觉是空载体,那就有个问题:你确定酶切时没出现问题?如果酶切正常出现如你所说的没切开,那么建议你用质粒做模板,目的基因引物再做下PCR,如果跑胶有目的片段则证明还是连进去了的,只是酶切出现了偶然事件,可以正常送样测序。
不抛弃,不放弃!
23楼2010-09-13 11:02:57
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-13 11:02:57:
个人觉得,你说重组质粒提出来后酶切没切出目的基因片段,感觉是空载体,那就有个问题:你确定酶切时没出现问题?如果酶切正常出现如你所说的没切开,那么建议你用质粒做模板,目的基因引物再做下PCR,如果跑胶有 ...

是连了T载体后酶切,酶切出来很乱,而且没有自己的目的条带。
24楼2010-09-14 11:46:26
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liyong1981

金虫 (正式写手)


PCR产物建议酶切时间延长,。过夜,当然要加BSA。这样连接效率才能高。
25楼2010-09-14 16:27:57
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