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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切的问题
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
silicare:什么是很乱，可以发图看看 2010-09-13 12:12:31
引用回帖:
Originally posted by zhyzx at 2010-09-11 19:25:08:
如果是克隆基因的话，建议你先连T载体，鉴定正确了，再切下来连目的载体

我就是连的T载体，酶切出来就是很乱
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21楼2010-09-13 09:50:52
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2010-09-13 09:50:52:

我就是连的T载体，酶切出来就是很乱

好像没怎么遇到这种情况，多做几次试试
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22楼2010-09-13 09:57:17
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biotech113

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人觉得，你说重组质粒提出来后酶切没切出目的基因片段，感觉是空载体，那就有个问题：你确定酶切时没出现问题？如果酶切正常出现如你所说的没切开，那么建议你用质粒做模板，目的基因引物再做下PCR，如果跑胶有目的片段则证明还是连进去了的，只是酶切出现了偶然事件，可以正常送样测序。
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不抛弃，不放弃！
23楼2010-09-13 11:02:57
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-13 11:02:57:
个人觉得，你说重组质粒提出来后酶切没切出目的基因片段，感觉是空载体，那就有个问题：你确定酶切时没出现问题？如果酶切正常出现如你所说的没切开，那么建议你用质粒做模板，目的基因引物再做下PCR，如果跑胶有 ...

是连了T载体后酶切，酶切出来很乱，而且没有自己的目的条带。
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24楼2010-09-14 11:46:26
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liyong1981

金虫 (正式写手)
PCR产物建议酶切时间延长，。过夜，当然要加BSA。这样连接效率才能高。
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25楼2010-09-14 16:27:57
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