应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切的问题
252/3返回列表上一页123下一页
查看: 1846  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

周_yan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):鼓励新虫交流~~ 2010-07-26 17:36:33
可以设一个对照即不酶切的质粒，然后跑电泳，就可以，如果切开了酶切的质粒会比对照跑的慢，并且还会有你的目的条带；如果酶切的质粒比对照跑的慢但没有目的基因的条带的话，可能是只切开了一个酶，另一个酶没有切开。可以加大体系切或者单酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-07-26 11:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-07-23 20:01:36:
你的目的片段和载体连上之后，也就是转化之前，跑胶验证了吗？如果是两条带就没连上，证明没切开

我试下
回复此楼
12楼2010-07-26 14:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canon-ph

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先连t 载体 然后切 再连表达载体
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2010-07-27 11:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by canon-ph at 2010-07-27 11:08:18:
先连t 载体 然后切 再连表达载体

我用了T载体连接，可是酶切后条带还是很多，也没有目的条带
赞一下 回复此楼
14楼2010-09-04 12:27:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是多用几个酶切验证
赞一下(1人) 回复此楼
一直向前！
15楼2010-09-04 13:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你要知道你有没有连上，不一定要酶切鉴定的，用PCR鉴定更方便啊。
我一般都是挑单克隆，摇菌，摇一两个小时（这时候离提质粒还早），就做个菌落PCR。一般可以知道那个菌有没有问题了。没问题的继续提质粒，如果有需要再进一步酶切鉴定。然后再测序鉴定。
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
16楼2010-09-04 14:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-09-04 14:42:42:
你要知道你有没有连上，不一定要酶切鉴定的，用PCR鉴定更方便啊。
我一般都是挑单克隆，摇菌，摇一两个小时（这时候离提质粒还早），就做个菌落PCR。一般可以知道那个菌有没有问题了。没问题的继续提质粒，如果有 ...

学习了！还有个问题想请教，为什么酶切之后会切出很多条带，也没有自己的目的条带，在37度切2H
赞一下 回复此楼
17楼2010-09-10 14:25:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2010-09-10 14:25:57:

学习了！还有个问题想请教，为什么酶切之后会切出很多条带，也没有自己的目的条带，在37度切2H

那要看你的酶切位点是不是单克隆位点了。
难道你的质粒本身序列也被切开了？你的目的序列多大？
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
18楼2010-09-11 19:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhyzx

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是克隆基因的话，建议你先连T载体，鉴定正确了，再切下来连目的载体
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2010-09-11 19:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-09-11 19:14:02:


那要看你的酶切位点是不是单克隆位点了。
难道你的质粒本身序列也被切开了？你的目的序列多大？

目的序列长2013，反正切的很乱，也没有自己的片段
赞一下 回复此楼
20楼2010-09-13 09:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 睡着数绵羊 的主题更新
252/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 焦虑 +6 水冰月月野兔 2026-03-13 8/400 2026-03-16 06:39 by lfq_198989
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 0857 资源与环境 285分 +6 未名考生 2026-03-09 6/300 2026-03-11 21:08 by 30660438
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭