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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切的问题
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周_yan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):鼓励新虫交流~~ 2010-07-26 17:36:33
可以设一个对照即不酶切的质粒，然后跑电泳，就可以，如果切开了酶切的质粒会比对照跑的慢，并且还会有你的目的条带；如果酶切的质粒比对照跑的慢但没有目的基因的条带的话，可能是只切开了一个酶，另一个酶没有切开。可以加大体系切或者单酶切。
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11楼2010-07-26 11:22:51
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-07-23 20:01:36:
你的目的片段和载体连上之后，也就是转化之前，跑胶验证了吗？如果是两条带就没连上，证明没切开

我试下
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12楼2010-07-26 14:13:49
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canon-ph

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先连t 载体 然后切 再连表达载体
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13楼2010-07-27 11:08:18
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by canon-ph at 2010-07-27 11:08:18:
先连t 载体 然后切 再连表达载体

我用了T载体连接，可是酶切后条带还是很多，也没有目的条带
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14楼2010-09-04 12:27:32
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是多用几个酶切验证
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一直向前！
15楼2010-09-04 13:48:15
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你要知道你有没有连上，不一定要酶切鉴定的，用PCR鉴定更方便啊。
我一般都是挑单克隆，摇菌，摇一两个小时（这时候离提质粒还早），就做个菌落PCR。一般可以知道那个菌有没有问题了。没问题的继续提质粒，如果有需要再进一步酶切鉴定。然后再测序鉴定。
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16楼2010-09-04 14:42:42
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-09-04 14:42:42:
你要知道你有没有连上，不一定要酶切鉴定的，用PCR鉴定更方便啊。
我一般都是挑单克隆，摇菌，摇一两个小时（这时候离提质粒还早），就做个菌落PCR。一般可以知道那个菌有没有问题了。没问题的继续提质粒，如果有 ...

学习了！还有个问题想请教，为什么酶切之后会切出很多条带，也没有自己的目的条带，在37度切2H
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17楼2010-09-10 14:25:57
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2010-09-10 14:25:57:

学习了！还有个问题想请教，为什么酶切之后会切出很多条带，也没有自己的目的条带，在37度切2H

那要看你的酶切位点是不是单克隆位点了。
难道你的质粒本身序列也被切开了？你的目的序列多大？
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生物资源交流QQ群：1044518333
18楼2010-09-11 19:14:02
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是克隆基因的话，建议你先连T载体，鉴定正确了，再切下来连目的载体
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19楼2010-09-11 19:25:08
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-09-11 19:14:02:


那要看你的酶切位点是不是单克隆位点了。
难道你的质粒本身序列也被切开了？你的目的序列多大？

目的序列长2013，反正切的很乱，也没有自己的片段
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20楼2010-09-13 09:49:05
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