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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

MolEPI: 1
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[交流] 【求助/交流】重组质粒转化已有18人参与

重组质粒转化后长出来的菌很少，这是为什么啊！

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1楼2010-07-20 12:13:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hulinyong

金虫 (正式写手)

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虫号: 114559
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专业: 生殖生物学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-08-02 17:00:25

我看楼主是不是用的PCR产物回收后直接进行酶切后连接的呀？
我觉得你的目的不在于长出来多少克隆，而在于这些克隆里有没有你要的片段。你的目的应该不是建什么文库吧，所以只要有目的克隆长出来就OK了。
个人觉得菌落PCR的方法假阳性或是假阴性比较多，可以试着用快速裂解法看一下有没有连接上片段或者挑上几个克隆提质粒做一下酶切，看有没有目的片段插入。