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求知的学生

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE样品处理已有10人参与

我现在刚接触SDS-PAGE,做了几次,效果不好。有问题想向大家请教一下。我用的浓缩胶是5%,分离胶是10%的。样品是血清,蛋白含量在40g/L左右。想问一下,样品应该怎么处理。我是取20微升样品与2x上样缓冲液混合等体积混合,沸水煮5min,再10000转离心,取上层10微升上样,不知道这样对不对,请大家不吝赐教,万分感谢。
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changes

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 求知的学生 at 2010-07-20 21:26:51:

不好意思,图片一时还无法上传。电压先是80v,后又变为120v。

不知蛋白marker跑的怎么样?如果也不好的话可能就是胶的问题了。
我记得电压好像是浓缩胶5V/cm,分离胶是12V/cm。不确定啊,手头没资料没法查。你看看你的电泳槽的说明书吧。
13楼2010-07-20 21:53:13
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li3564617

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):学术交流 鼓励 2010-07-18 23:47:53
分离胶的浓度与蛋白质的分子量大小有关,一般生化试验书上都有,样品处理这样应该没问题
2楼2010-07-18 21:25:51
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):此言有理 2010-07-18 23:48:08
方法参见molecular cloning
你说效果不好,具体是怎么个不好法?最好有图上来,看到图才能说明问题
3楼2010-07-18 23:41:32
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小周

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们都是沸水浴5min后,置冰上1min.
4楼2010-07-19 09:19:53
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