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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教大家有关RT-PCR的几个问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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小羊羊

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教大家有关RT-PCR的几个问题 已有2人参与

做RT-PCR的时候，预处理怎么做？加了EDTA后要反应多久呢？另外，反转录酶的反应时间和温度是如何确定的？比如M-MLV要42度，看老师做有时候是50分钟，有时候是60分钟，还有终止反应的温度和时间，都要如何来确定呢？希望高手指点，小女子不胜感激！！！
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1楼 2010-07-17 11:40:41
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steamsn

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎参与交流~~ 2010-07-17 15:55:31
按照试剂使用说明来做，一般情况下，反转录酶的反应温度要求42度或50度左右，这个是根据各种酶自身特性的来定的，反应时间也有长又短，对于终止反应来说，不是要求的非常严格，你刚开始做的话，根据说明书就好，做得多了，你自己就会知道那些步骤可以省略掉了。
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我命由我不由天
3楼2010-07-17 15:41:57
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lysliaa

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个一般试剂盒上有说明的！不同公司的试剂盒使用上稍有差别的
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2楼2010-07-17 13:09:36
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