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金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教大家有关RT-PCR的几个问题已有2人参与

做RT-PCR的时候，预处理怎么做？加了EDTA后要反应多久呢？另外，反转录酶的反应时间和温度是如何确定的？比如M-MLV要42度，看老师做有时候是50分钟，有时候是60分钟，还有终止反应的温度和时间，都要如何来确定呢？希望高手指点，小女子不胜感激！！！

1楼 2010-07-17 11:40:41

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铁虫 (小有名气)

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这个一般试剂盒上有说明的！不同公司的试剂盒使用上稍有差别的

2楼2010-07-17 13:09:36

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金虫 (小有名气)

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lstt09nk(金币+2):欢迎参与交流~~ 2010-07-17 15:55:31

按照试剂使用说明来做，一般情况下，反转录酶的反应温度要求42度或50度左右，这个是根据各种酶自身特性的来定的，反应时间也有长又短，对于终止反应来说，不是要求的非常严格，你刚开始做的话，根据说明书就好，做得多了，你自己就会知道那些步骤可以省略掉了。

我命由我不由天

3楼2010-07-17 15:41:57

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