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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Northern blot
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danny0426

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用的是生物素的，KPL公司的，我的师兄他们都做的不错，我的做了好几遍了，一直没有理想的结果，做完一次郁闷一次！
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11楼2010-08-21 15:32:07
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foreverjohn

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mgangle at 2010-08-19 20:18:26:

用试剂盒2比较方便，可以按照自己的需要调整曝光时间

试剂盒2需要X光胶片，是不是还需要专门开片子的仪器，你们是用的什么仪器呢？我正在选择1还是2，化学发光是不是对最后直接拍照就可以了？我想做Southern，将酵母染色体电泳分离后再用探针印记，不知道是否有这方面的经验供分享！
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12楼2010-08-21 16:42:30
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by mgangle at 2010-08-18 10:38:55:



你好！反向Northern我们没有做过！我看了一下简单介绍，反向Northern是把
RNA反转成cDNA后转膜，用RNA标记的同位素作为探针，这个感觉与Southern
有点类似，因为我们是用地高辛做的，不知道和同位素有没有 ...

地高辛行吗，灵敏度好吗，我要做小RNA的northern，老师建议用同位素，但是那东西辐射啊，巨不愿意做。
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13楼2010-08-21 22:04:46
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roxxane

新虫 (初入文坛)

如何标记反转出的cDNA第一链呢

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
想请问各位大侠，用什么方法反转出来的cDNA用DIG标记上呢，我用klenow酶试过没有标记上。

[ Last edited by roxxane on 2010-11-25 at 21:20 ]
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14楼2010-11-25 21:15:11
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vickie20

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
即将要做northern blot了不知道各位大侠能提供啥注意事项不？
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15楼2011-08-04 10:40:09
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longlikun

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
正在做这个，参与讨论。
转膜时候，胶是不是不能加EB啊？
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16楼2011-08-04 11:27:53
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
引用回帖:
16楼: Originally posted by longlikun at 2011-08-04 11:27:53:
正在做这个，参与讨论。
转膜时候，胶是不是不能加EB啊？

可以加，用双蒸水和低浓度NaOH冲洗就OK了，可以参照分子克隆第三版碱转法
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
17楼2011-08-04 13:25:30
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xyf-1988

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by mgangle at 2010-08-18 10:51:58
我们用的是Roche的试剂盒，其实只要你的RNA提取没有问题，在跑胶的时候不降解，一旦转到膜上，RNA与尼龙膜交联后，是不会有什么问题了！主要是样品的质量和转膜的效率！...

你好，我能问问你用roche的试剂盒时，你们在标记探针效率时阳控和样本能出几个点呢？
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走自己的路，努力做好自己。
18楼2013-08-06 18:35:57
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
引用回帖:
18楼: Originally posted by xyf-1988 at 2013-08-06 18:35:57
你好，我能问问你用roche的试剂盒时，你们在标记探针效率时阳控和样本能出几个点呢？...

请问你说的是探针效率检测吗？一般点1 10-1,10-2，10-3,10-4就足够了
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
19楼2013-08-08 13:43:07
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kong870608

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by mgangle at 2010-08-19 20:18:26
用试剂盒2比较方便，可以按照自己的需要调整曝光时间

你好，我也在做Northern blot 但是一直不出结果。向你求助。方便留下你的QQ号吗。谢谢
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20楼2013-10-31 18:22:40
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