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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】到底什么原因？
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girlna

金虫 (小有名气)

木虫

[交流] 【求助/交流】到底什么原因？ 已有7人参与

我们做边接转化，转化后直接涂皿却没有菌落生长，但是我们把转化的菌在LB中摇上16个小时后再涂皿却有菌落生长，再挑单克隆培养提取质粒却提不出来，有没有哪位朋友遇见过这种情况，分析一下这是什么原因，
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每天进步一点点
1楼 2010-06-30 16:51:30
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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情况不好说，很多情况都有~
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2楼2010-06-30 16:59:37
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好楼主说的再清楚点
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
3楼2010-06-30 17:07:46
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girlna

金虫 (小有名气)

木虫
dhd997:可以直接在第一楼编辑帖子。 2010-06-30 19:01:52
lmzxcom1:我个人认为LB中的氯霉素不稳定，一般我们都控制抗生素时间的 2010-06-30 19:55:41
就是我们在PNW33N，这个质粒上连接一个Lux基因，转化到感觉态的DH5α空菌中，氯酶素抗性平板在涂皿发现无菌落生长，但是如果我们把转化的菌在添加氯酶素LB培养基中培养16个小时后再涂氯酶素抗性平板有菌落生长，我们就提质粒，但是提不出来，望高手指点
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每天进步一点点
4楼2010-06-30 17:29:27
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duanyongzhong

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):热心回答 2010-06-30 21:53:55
一种可能情况是，你没有把质粒转进去，所以在涂有氯霉素的抗性平板上不能生长提质粒也提不出来；在有氯霉素的LB培养基和抗性平板上能够生长，是不是由于这两种条件下你用的氯霉素的浓度不同，产生了不同的结果，如果排除上述原因，那就是在操作过程中有失误的地方。
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5楼2010-06-30 18:03:30
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LB broth中抗生素失效或没加
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6楼2010-06-30 20:40:10
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同感,与抗生素有关吧.还应该继续电转试试..
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在哪里~在哪里见过你~
7楼2010-07-01 10:17:18
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先用液体培养后用涂板鉴定确实能增加阳性的检出。从lz的描述来看，液体培养过程中某些细菌产生了抗药性，在cm的筛选下形成优势群，导致了在含有抗生素的液体和固体培养基中都有生长，但其实是假阳性。

建议lz在提质粒之前用PCR的方法鉴定一下，这样可以减少很大的工作量。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-07-01 16:14:40
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