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hdzjy2005

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有人用过ROX染料吗? 已有4人参与

我在做RT-PCR,不是用的试剂盒,现在想自己加ROX来校正误差,请问有人知道在哪能买到ROX吗?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-06-23 17:11:29
hdzjy2005(金币+15): 2010-06-23 18:11:29
有些机器需要ROX有些不需要……ABI的机器有时候就需要
ROX似乎Invitrogen有单独卖的
2楼2010-06-23 15:57:50
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silicare

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优秀版主

太多了,基本上做定量试剂盒的公司都卖
3楼2010-06-23 16:00:43
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hdzjy2005

金虫 (小有名气)

继续求教,呵呵

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-23 15:57:50:
有些机器需要ROX有些不需要……ABI的机器有时候就需要
ROX似乎Invitrogen有单独卖的

我用的是ABI的7300,孔间的信号差别很大,影响了CT值的测定,现在感觉需要ROX校正。还有,ABI RT-PCR不用阳性参比,这样提供的数据是不是不可信?
4楼2010-06-23 16:18:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:28:23
引用回帖:
Originally posted by hdzjy2005 at 2010-06-23 16:18:47:

我用的是ABI的7300,孔间的信号差别很大,影响了CT值的测定,现在感觉需要ROX校正。还有,ABI RT-PCR不用阳性参比,这样提供的数据是不是不可信?

孔间Ct值差异大,首先要考虑的是自己的实验手法的问题
我用10ul体系做,3个复孔Ct值波动不会超过1,一般都在0.1~0.5之间
关键就是上样的时候多吹打几下,保证体系均匀,同时枪头一定要用进口的(Axygen),吸附性小,每次取样的均一性强
5楼2010-06-23 16:22:46
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

阳性参比?你指的是……
6楼2010-06-23 16:23:45
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hdzjy2005

金虫 (小有名气)

passive referense

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-23 16:23:45:
阳性参比?你指的是……

passive referense,这怎么翻译?passive referense里有一种是ROX
7楼2010-06-23 16:33:06
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hdzjy2005

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-23 16:22:46:


孔间Ct值差异大,首先要考虑的是自己的实验手法的问题
我用10ul体系做,3个复孔Ct值波动不会超过1,一般都在0.1~0.5之间
关键就是上样的时候多吹打几下,保证体系均匀,同时枪头一定要用进口的(Axygen), ...

我们这台7300从A排到H排信号呈降低趋势,不光我的实验结果这样。再有,我觉得我的体系混匀了,而且也是Axygen的枪头。
曾经用ABI的试剂盒做过,TaqMan探针的,那时信号也很重现,觉得那是参比校正的结果。
8楼2010-06-23 16:42:43
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hdzjy2005

金虫 (小有名气)

reference

引用回帖:
Originally posted by hdzjy2005 at 2010-06-23 16:33:06:

passive referense,这怎么翻译?passive referense里有一种是ROX

我拼错了
9楼2010-06-23 16:56:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

如果是机器本身的问题,那么加ROX还是必要的
当然了,要找工程师回来弄
qPCR仪的均一性应该要很好才行
10楼2010-06-23 17:57:32
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