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xfchzh

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助:蛋白质样品浓度比较小,电泳上样量多少合适呀?已有14人参与

大家好,我以前没做过蛋白质电泳,现在样品浓度大概0.1μg/μL,上样量多少比较合适呢?用5X样品缓冲液,添加比例是多少呢? .yF@Ow  
先谢谢大家了!
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邓楠

铁虫 (小有名气)

根据样品的复杂程度,上样量可以调节。我平时血清上1ug,银染效果不错。如果是单一蛋白质,银染的话,几百ng就够了。
13楼2012-05-16 09:46:41
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:29:31
考蓝染色的分辨率也就是在微克级别(有资料显示100ng),这样浓度你取20微升就会很明显的条带了。
如果需要更大的蛋白量可以取100微升,加10微升Loading Buffer,沸水煮的时候敞开离心管的盖子(管口尽可能高于浮漂,防止水渐入),让其蒸发部分,也能达到浓缩的效果。煮个十几分钟的,然后再敞开盖子晾一会,上样的时候能上多少上多少。

还需要更大上样量只能使用l超滤管浓缩了。我平常嫌麻烦,轻易不这么做。
2楼2010-06-23 13:35:47
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zemin_fang

木虫 (正式写手)

5-10ul就足够了。理由楼上说了。
3楼2010-06-23 17:06:13
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
20-40ug/well........................
4楼2010-06-23 20:51:59
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