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chunmeiyang银虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】有关碳酐酶的问题，急！急！急！ 已有1人参与
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| 请问各位，你们纯化带GST标签的酶时，之后有没有将GST标签切除啊？都是怎么切的啊？我正在纯化碳酐酶，上面带的就是这个标签，GST标签比较大，对我的后续试验可能会有影响，想将其切除，但用凝血酶试过几次，都没成功，各位高人，帮帮忙啊~~ |
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月月大可
木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:31:46
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:31:46
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你得明确你使用的是那个载体才能知道用哪个酶去切！！！！！！！！ pGEX系列的载体中切出GST标签的有Thrombin的，还有PreScission Protease、Factor Xa .我们组使用的是PP切，很容易就切掉了。 载体图谱：http://www.sgc.utoronto.ca/SGC-WebPages/Vector_PDF/pGEX-6P-2.pdf 另外我使用的Thrombin切出His tag，感觉不是很难。我的酶都是十年前留下的冷冻干粉，也不知道能不能用了。偶直接加生理盐水溶解后就那么用了，效果还相当不错。4℃过夜酶切的很好。 Thrombin作用的时候要保证pH在7-8，效果会比较好，150mM NaCl，2.5mM CaCl2，外加千分之一的β-ME。 [ Last edited by 月月大可 on 2010-6-23 at 13:13 ] |
2楼2010-06-23 13:12:15
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