| 查看: 407 | 回复: 1 | |||
chunmeiyang银虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】有关碳酐酶的问题，急！急！急！ 已有1人参与
|
| 请问各位，你们纯化带GST标签的酶时，之后有没有将GST标签切除啊？都是怎么切的啊？我正在纯化碳酐酶，上面带的就是这个标签，GST标签比较大，对我的后续试验可能会有影响，想将其切除，但用凝血酶试过几次，都没成功，各位高人，帮帮忙啊~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
月月大可
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:31:46
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:31:46
|
你得明确你使用的是那个载体才能知道用哪个酶去切！！！！！！！！ pGEX系列的载体中切出GST标签的有Thrombin的，还有PreScission Protease、Factor Xa .我们组使用的是PP切，很容易就切掉了。 载体图谱：http://www.sgc.utoronto.ca/SGC-WebPages/Vector_PDF/pGEX-6P-2.pdf 另外我使用的Thrombin切出His tag，感觉不是很难。我的酶都是十年前留下的冷冻干粉，也不知道能不能用了。偶直接加生理盐水溶解后就那么用了，效果还相当不错。4℃过夜酶切的很好。 Thrombin作用的时候要保证pH在7-8，效果会比较好，150mM NaCl，2.5mM CaCl2，外加千分之一的β-ME。 [ Last edited by 月月大可 on 2010-6-23 at 13:13 ] |
2楼2010-06-23 13:12:15
20