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sirbq

[交流] 【交流】效液相色谱法做的标准曲线 已有2人参与

1 》效液相色谱法做的标准曲线,柱子是(依利特Hypersil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾(46:54),磷酸调节pH至4.0;检测波长:288 nm;流速:1 mL/min;柱温:38 ℃;进样量:10 μL。做的标准曲线为:Y=18.992X-74.855,r2=0.9984,X是药物浓度(ug/ml)Y是峰面积 截距怎么呢么大呀,一般来说截距应该比斜率小很多,但是我做的怎么截距这么大,各位有做过吗? 截距大意味着系统误差比较大,改怎么改善呢?
2 》同一份储备液,在稀释的时候,是0.25,0.5,1,2,3,4,5 ml 前面两个浓度是用移液枪取的,后面是用移液管取的,有影响吗?
3》进液相的时候是每个点进一次,还是进两三次取平均值呢?究竟怎样才规范一点?

4》线性范围的最低浓度和最高浓度的范围怎么确定啊?
希望各位虫虫指导一下啊!
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ddw888

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-06-18 22:06:06
1。这种现象经常有,主要是浓度与响应本就不是正比关系,或有干扰,但也有可能溶液配制问题,若是第一种情况,不一定能改善,若这样含量测定最好采用标准曲线法或两点校正法,或待测样品浓度尽可能与对照品浓度相近
2。要看你用的什么移液枪,有无校正,通常最好统一用移液管,且需标化
3。理论上要取平均值
4。如果是测体外样本,样品浓度的变化不大时,标准曲线范围不需要很宽
3楼2010-06-17 12:40:46
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