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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】实验 毕业 急啊
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】实验 毕业 急啊 已有6人参与

各位虫友们：
     做pcr、跑电泳一直没什么好图，marker跑的很好，应该是pcr的效果不好，酶没什么问题，基因组估计提的不好，我是用自己配试剂提的，跑了电泳，可是出现好多条带，试剂盒老板又舍不得买，怎么办？基因组对pcr影响大么？谁能救救我啊？明年就快毕业了，好急啊
      麻烦各位了啊
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1楼 2010-06-09 10:31:42
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-06-09 18:56:26
这图质量也够差的了...没调焦吗？
跑gDNA，用0.8%~1%的胶，marker用λ Hind III。较完整的gDNA大小约为23kb。
从这个图来看，似乎gDNA还行~~下面那一大堆的smear可能是RNA。如果有条件的话，用RNA酶处理一下再跑跑看。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-06-09 16:58:38
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-09 12:13:22
lstt09nk(金币+3):感谢参与~~欢迎回来多多交流~~ 2010-06-09 18:55:51
基因组做模板的话，要考虑到基因组的复杂度和目的基因的拷贝数
基因组简单，或者拷贝数高的话，可以少加一点

基因组DNA一般自己配试剂提不会出太大问题，是不是没有纯化好，残余有抑制PCR反应的物质
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2楼2010-06-09 11:59:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-09 16:45:29
你可以测测看是不是gDNA的杂质太多影响了PCR
然后PCR确实是要好的酶才能做出漂亮的结果
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-06-09 12:57:22
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2):欢迎发图 2010-06-09 16:45:19



各位，这是跑出来的图片，marker是2000的，是基因组么
谢谢啊
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-06-09 16:41:14
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