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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】实验 毕业 急啊
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】实验 毕业 急啊 已有6人参与

各位虫友们：
     做pcr、跑电泳一直没什么好图，marker跑的很好，应该是pcr的效果不好，酶没什么问题，基因组估计提的不好，我是用自己配试剂提的，跑了电泳，可是出现好多条带，试剂盒老板又舍不得买，怎么办？基因组对pcr影响大么？谁能救救我啊？明年就快毕业了，好急啊
      麻烦各位了啊
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1楼 2010-06-09 10:31:42
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-09 12:13:22
lstt09nk(金币+3):感谢参与~~欢迎回来多多交流~~ 2010-06-09 18:55:51
基因组做模板的话，要考虑到基因组的复杂度和目的基因的拷贝数
基因组简单，或者拷贝数高的话，可以少加一点

基因组DNA一般自己配试剂提不会出太大问题，是不是没有纯化好，残余有抑制PCR反应的物质
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2楼2010-06-09 11:59:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-09 16:45:29
你可以测测看是不是gDNA的杂质太多影响了PCR
然后PCR确实是要好的酶才能做出漂亮的结果
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3楼2010-06-09 12:57:22
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2):欢迎发图 2010-06-09 16:45:19



各位，这是跑出来的图片，marker是2000的，是基因组么
谢谢啊
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4楼2010-06-09 16:41:14
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li493895033
5楼2010-06-09 16:54:08
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-06-09 18:56:26
这图质量也够差的了...没调焦吗？
跑gDNA，用0.8%~1%的胶，marker用λ Hind III。较完整的gDNA大小约为23kb。
从这个图来看，似乎gDNA还行~~下面那一大堆的smear可能是RNA。如果有条件的话，用RNA酶处理一下再跑跑看。
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6楼2010-06-09 16:58:38
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2010-06-09 16:58:38:
这图质量也够差的了...没调焦吗？
跑gDNA，用0.8%~1%的胶，marker用λ Hind III。较完整的gDNA大小约为23kb。
从这个图来看，似乎gDNA还行~~下面那一大堆的smear可能是RNA。如果有条件的话，用RNA酶处 ...

谢谢啊，请问这个用于pcr会影响效果么？
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7楼2010-06-10 10:19:44
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 青青草hwj at 2010-06-09 16:41:14:



各位，这是跑出来的图片，marker是2000的，是基因组么
谢谢啊

这个Marker也跑得不好呀，这是我提的基因组DNA跑的胶。


我这是植物的基因组，不知道你的是什么的？

[ Last edited by xpb2005 on 2010-6-10 at 11:38 ]
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8楼2010-06-10 11:36:47
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 青青草hwj at 2010-06-10 10:19:44:

谢谢啊，请问这个用于pcr会影响效果么？

用gDNA做模板进行PCR...gDNA质量不好的话当然会影响结果咯。
but...PCR结果不好的可能性很多，引物、退火温度、Mg2+浓度、酶活性甚至扩增片段长度与延伸时间都有可能对最后的结果造成影响。具体原因要看你的整个实验过程和操作才能分析。

http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=9247219wlnw0cdoxacwc5kz

这个资料可以看看，也许有点帮助。
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9楼2010-06-10 13:00:48
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青青草hwj

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-10 11:36:47:

这个Marker也跑得不好呀，这是我提的基因组DNA跑的胶。


我这是植物的基因组，不知道你的是什么的？

[ Last edited by xpb2005 on ...

你好，谢谢啊，我的也是植物的基因组，怎么差异那么大哦？能看看你的步骤么？好急啊，你什么时候有空？向你请教请教好么？
   非常感谢啊
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10楼2010-06-11 15:24:12
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