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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 营养安全 » 【求助】求助ACE抑制活性的测定方法
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weip

铜虫 (小有名气)
★
shuoshine(金币+1):谢谢参与
建议查看英文文献，具体名称不记得了
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11楼2010-06-24 13:17:27
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army888888

至尊木虫 (文坛精英)
★
shuoshine(金币+1):谢谢参与
1  仪器与试剂
Agilent 1100 HPLC系统（Agilent，USA）：高压二元泵、紫外检测器、在线脱气机、自动进样器；Agilent色谱工作站，Zorbax SB-Aq色谱柱（5µm,4.6×150mm, Agilent，USA)，乙腈（色谱纯），马尿酸（色谱纯）。
2  样品预处理
取7ml待测样（豆乳或牛乳等）品置于50ml离心管，调pH至8.3，取1.8ml离心（10000g）10min，取清液，待ACE抑制率测定。
1.8ml离心管中加40ul 10mM HHL（溶于0.3M NaCl，0.1M 硼酸缓冲溶液，pH 8.3）和40ul已预处理样品混合后再加40ul 10mU/ml ACE（溶于0.3M NaCl，0.1M 硼酸缓冲溶液，pH 8.3）混合（转速约达8000转/分时停转），37℃(空气摇床，恒温水浴)反应30min，取出离心管，立即转入已准备好的85℃水浴中灭活5min后冷却、离心（转速约达8000转/分时停转）加120 ul高纯水离心混合（转速约达8000转/分时停转）后经0.45µm过滤待测马尿酸含量。
另外再做40ulHHL+40ul水+40ulACE（对照）和40ulHHL+80ul水的样品（平行3次）。
ACE抑制率按下式计算：
ACE抑制率(%) = ([HA]c –（[HA]s-[HA]b) / ([HA]c – [HA]H) × 100%
式中，[HA]c：对照样品马尿酸浓度（加缓冲液）；[HA]s：待测样品的马尿酸浓度；[HA]b ：空白样中的马尿酸浓度；[HA]H：HHL标准品中所含马尿酸浓度。
若你们测定的空白样品中没有马尿酸的话，可以不测空白样品的马奶酸含量，以便减少工作量。
3  色谱条件
流动相：0.1%TFA水溶液和0.1%TFA乙腈溶液，体积比为75∶25；流速1.5 ml/min；紫外检测波长228nm；柱温：35℃；进样量：10μl。
4  绘制工作曲线
将马尿酸标准品1.00，5.00，10.00，20.00和50.00 mg/ml系列浓度进样分析，测定相应峰面积后进行线性回归。
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12楼2010-06-30 17:05:22
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李裸王

金虫 (小有名气)
★
shuoshine(金币+1): 谢谢参与
你好，本人也是在测ACE酶的抑制活性，可以交流一下ACE酶的使用吗？QQ2238795579
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ONEPIECE
13楼2015-04-13 09:29:49
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乌臼-547

新虫 (初入文坛)
★
shuoshine(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
7楼: Originally posted by 玉兰花 at 2010-06-07 17:47:32
我师兄做过ACE抑制活性的测定：
用含有0.3mol/L NaCl的0.1mol/L硼酸盐缓冲液(pH8.3)将Hip-His-Leu配成5.0mmol/L的溶液。在10ml试管中加入200μl的5.0mmol/L Hip-His-Leu溶液和80μl的样品，于37℃保温3min后，再加 ...

你好，我现在也准备体外测ACE抑制率，你师兄的这个方法有发文章么？？能不能搜得到？
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14楼2015-07-01 10:56:42
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18822073576

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 玉兰花 at 2010-06-07 17:47:32
我师兄做过ACE抑制活性的测定：
用含有0.3mol/L NaCl的0.1mol/L硼酸盐缓冲液(pH8.3)将Hip-His-Leu配成5.0mmol/L的溶液。在10ml试管中加入200μl的5.0mmol/L Hip-His-Leu溶液和80μl的样品，于37℃保温3min后，再加 ...

样品是什么？

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15楼2017-03-21 09:33:54
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Lxd2018

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 玉兰花 at 2010-06-07 17:47:32
我师兄做过ACE抑制活性的测定：
用含有0.3mol/L NaCl的0.1mol/L硼酸盐缓冲液(pH8.3)将Hip-His-Leu配成5.0mmol/L的溶液。在10ml试管中加入200μl的5.0mmol/L Hip-His-Leu溶液和80μl的样品，于37℃保温3min后，再加 ...

ACE溶液，是直接向ACE小瓶中注射蒸馏水？注射多少？

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16楼2018-03-20 15:25:55
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Lxd2018

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
1楼: Originally posted by shuoshine at 2010-06-07 10:51:18
各位有没有做过ACE抑制活性的体外测定的，即ACE与HHL反应生成马尿酸的分光光度法测定。本人实验几次结果均不理想，现求助具体测定方法内容，越详细越好。非常感谢，祝愿大家心想事成，万事如意！

ACE在120℃下活性不受影响呢？

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17楼2018-03-23 09:53:45
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