【求助/交流】电泳时间长，条带消失的原因分析 - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-06-03 08:42:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

csjiang1123

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 0.137
金币: 2008.6
散金: 200
红花: 1
帖子: 277
在线: 57.5小时
虫号: 527098
注册: 2008-03-17
性别: GG
专业: 林木遗传育种学

引用回帖:

Originally posted by zcqcau at 2010-06-03 01:40:57:
EB的电泳方向是与DNA反向的，如果EB都跑光了，DNA也就显示不出来了，也就以为“跑光了”。

EB不是和DNA结合了吗？难道结合不牢固，EB带正电荷吗？请指教？

12楼2010-06-03 08:44:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 18 (小学生)
贵宾: 0.003
金币: 5847.6
红花: 6
帖子: 952
在线: 116.9小时
虫号: 709538
注册: 2009-02-26
专业: 微生物生理与生物化学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-03 11:11:09

引用回帖:

Originally posted by csjiang1123 at 2010-06-03 08:44:48:

EB不是和DNA结合了吗？难道结合不牢固，EB带正电荷吗？请指教？

是的，EB带正电，会往负极跑（胶的上部），跑的时间长了，DNA跑到胶的下部，而这里EB含量降低，就可能你看不见条带

这种情况只有在EB灌胶的时候加在胶里这种情况才会出现，如果是跑完电泳再染胶，是不会出现这种情况的

13楼2010-06-03 08:51:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

MolEPI: 1
应助: 24 (小学生)
金币: 5952.8
散金: 1705
红花: 17
帖子: 2081
在线: 1240.5小时
虫号: 463482
注册: 2007-11-20
专业: 食品加工技术

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):好像不是空调师傅的责任吧。 2010-06-03 11:11:42

我有一次是这样的刚点上样，结果师傅来修空调我就把电泳槽搬着挪了一个位置，结果再次跑的时候就什么也看不见了

14楼2010-06-03 09:19:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wywangying169

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 265.6
帖子: 173
在线: 38.2小时
虫号: 530789
注册: 2008-03-22
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

没插反电极吧？我有次一粗心，就那样子才几分钟就跑光了。还有可能就是时间太长弥散了~~~~

好好自学，好好工作

15楼2010-06-03 14:20:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 480.8
帖子: 211
在线: 30.4小时
虫号: 364980
注册: 2007-05-08
专业: 心脑血管药物药理

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-06-03 18:58:17

引用回帖:

Originally posted by ben1147 at 2010-06-03 08:51:45:

是的，EB带正电，会往负极跑（胶的上部），跑的时间长了，DNA跑到胶的下部，而这里EB含量降低，就可能你看不见条带

这种情况只有在EB灌胶的时候加在胶里这种情况才会出现，如果是跑完电泳再染胶，是不会出 ...

DNA分子扩散（如果片段小的话会更厉害）；胶不水平（特别是胶薄的时候）电泳时间长，很快就跑出胶了。至于EB结合的问题，不会影响这么大的。EB在电泳初期已经插入DNA，在电泳这一点时间脱出来的可能性还是比较小的。还有什么电泳时间长，溶液温度急剧上升，都是很重要的原因！常常连胶都变形不规则了！

16楼2010-06-03 14:21:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 18 (小学生)
贵宾: 0.003
金币: 5847.6
红花: 6
帖子: 952
在线: 116.9小时
虫号: 709538
注册: 2009-02-26
专业: 微生物生理与生物化学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-06-03 18:58:57

引用回帖:

Originally posted by ququr008 at 2010-06-03 14:21:55:

DNA分子扩散（如果片段小的话会更厉害）；胶不水平（特别是胶薄的时候）电泳时间长，很快就跑出胶了。至于EB结合的问题，不会影响这么大的。EB在电泳初期已经插入DNA，在电泳这一点时间脱出来的可能性还是比较 ...

电泳时间长EB迁移确实不会导致条带不能显色，但是有时候会使条带着色不均，尤其是小分子条带，荧光通常很弱，影响观察，这在现实中是出现过的。至于烧胶，低电压长时间电泳，产热散热比较容易达到平衡，烧胶倒不至于，主要是高电压跑（比如检测RNA的时候，>15V/cm）容易发生，电泳槽要做好散热

17楼2010-06-03 14:28:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jingcp200320

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 524.5
红花: 2
帖子: 218
在线: 12.6小时
虫号: 958529
注册: 2010-03-01
性别: GG
专业: 分子生物学

常见，细节注意了就应该没有问题！@！

18楼2010-06-03 16:33:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂

应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 1.661
金币: 8785.9
散金: 1465
红花: 18
沙发: 18
帖子: 3563
在线: 456.6小时
虫号: 819954
注册: 2009-08-01
性别: MM
专业: 陪堂主唠嗑

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):good 2010-06-03 23:37:46

引用回帖:

Originally posted by 老夏853 at 2010-06-03 09:19:44:
我有一次是这样的刚点上样，结果师傅来修空调我就把电泳槽搬着挪了一个位置，结果再次跑的时候就什么也看不见了

那是因为搬的过程中缓冲液晃动，而你刚点好样，样品随着缓冲液的晃动飘起来了，飘到缓冲液里面，点样孔没东西了，可不就跑不出来了呗~~所以说，点样后千万不能搬动电泳槽的哦~~

坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~

19楼2010-06-03 19:02:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

csjiang1123

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 0.137
金币: 2008.6
散金: 200
红花: 1
帖子: 277
在线: 57.5小时
虫号: 527098
注册: 2008-03-17
性别: GG
专业: 林木遗传育种学

引用回帖:

Originally posted by lstt09nk at 2010-06-03 19:02:03:

那是因为搬的过程中缓冲液晃动，而你刚点好样，样品随着缓冲液的晃动飘起来了，飘到缓冲液里面，点样孔没东西了，可不就跑不出来了呗~~所以说，点样后千万不能搬动电泳槽的哦~~

说得对，点样后不能挪动电泳槽。