【求助/交流】电泳时间长，条带消失的原因分析 - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-06-03 08:42:45

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csjiang1123

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Originally posted by zcqcau at 2010-06-03 01:40:57:
EB的电泳方向是与DNA反向的，如果EB都跑光了，DNA也就显示不出来了，也就以为“跑光了”。

EB不是和DNA结合了吗？难道结合不牢固，EB带正电荷吗？请指教？

12楼2010-06-03 08:44:48

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ben1147

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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-03 11:11:09

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Originally posted by csjiang1123 at 2010-06-03 08:44:48:

EB不是和DNA结合了吗？难道结合不牢固，EB带正电荷吗？请指教？

是的，EB带正电，会往负极跑（胶的上部），跑的时间长了，DNA跑到胶的下部，而这里EB含量降低，就可能你看不见条带

这种情况只有在EB灌胶的时候加在胶里这种情况才会出现，如果是跑完电泳再染胶，是不会出现这种情况的

13楼2010-06-03 08:51:45

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老夏853

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reasonspare(金币+2):好像不是空调师傅的责任吧。 2010-06-03 11:11:42

我有一次是这样的刚点上样，结果师傅来修空调我就把电泳槽搬着挪了一个位置，结果再次跑的时候就什么也看不见了

14楼2010-06-03 09:19:44

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wywangying169

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没插反电极吧？我有次一粗心，就那样子才几分钟就跑光了。还有可能就是时间太长弥散了~~~~

好好自学，好好工作

15楼2010-06-03 14:20:26

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ququr008

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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-06-03 18:58:17

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Originally posted by ben1147 at 2010-06-03 08:51:45:

是的，EB带正电，会往负极跑（胶的上部），跑的时间长了，DNA跑到胶的下部，而这里EB含量降低，就可能你看不见条带

这种情况只有在EB灌胶的时候加在胶里这种情况才会出现，如果是跑完电泳再染胶，是不会出 ...

DNA分子扩散（如果片段小的话会更厉害）；胶不水平（特别是胶薄的时候）电泳时间长，很快就跑出胶了。至于EB结合的问题，不会影响这么大的。EB在电泳初期已经插入DNA，在电泳这一点时间脱出来的可能性还是比较小的。还有什么电泳时间长，溶液温度急剧上升，都是很重要的原因！常常连胶都变形不规则了！

16楼2010-06-03 14:21:55

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ben1147

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引用回帖:

Originally posted by ququr008 at 2010-06-03 14:21:55:

DNA分子扩散（如果片段小的话会更厉害）；胶不水平（特别是胶薄的时候）电泳时间长，很快就跑出胶了。至于EB结合的问题，不会影响这么大的。EB在电泳初期已经插入DNA，在电泳这一点时间脱出来的可能性还是比较 ...

电泳时间长EB迁移确实不会导致条带不能显色，但是有时候会使条带着色不均，尤其是小分子条带，荧光通常很弱，影响观察，这在现实中是出现过的。至于烧胶，低电压长时间电泳，产热散热比较容易达到平衡，烧胶倒不至于，主要是高电压跑（比如检测RNA的时候，>15V/cm）容易发生，电泳槽要做好散热

17楼2010-06-03 14:28:59

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jingcp200320

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常见，细节注意了就应该没有问题！@！

18楼2010-06-03 16:33:03

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lstt09nk

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scelab(金币+1):good 2010-06-03 23:37:46

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Originally posted by 老夏853 at 2010-06-03 09:19:44:
我有一次是这样的刚点上样，结果师傅来修空调我就把电泳槽搬着挪了一个位置，结果再次跑的时候就什么也看不见了

那是因为搬的过程中缓冲液晃动，而你刚点好样，样品随着缓冲液的晃动飘起来了，飘到缓冲液里面，点样孔没东西了，可不就跑不出来了呗~~所以说，点样后千万不能搬动电泳槽的哦~~

坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~

19楼2010-06-03 19:02:03

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csjiang1123

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Originally posted by lstt09nk at 2010-06-03 19:02:03:

那是因为搬的过程中缓冲液晃动，而你刚点好样，样品随着缓冲液的晃动飘起来了，飘到缓冲液里面，点样孔没东西了，可不就跑不出来了呗~~所以说，点样后千万不能搬动电泳槽的哦~~

说得对，点样后不能挪动电泳槽。