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wuweibewin

金虫 (正式写手)

[交流] 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定大于50Kb的植物DNA

利用琼脂糖凝胶电泳鉴定大于50Kb的植物DNA所需的条件：
说明电泳中  凝胶浓度、电泳电压、电泳时间等等实验条件即可！

谢绝教科书以及国产来源的资料及文献，要真实可靠的实验过程！
谢谢虫友不吝赐教！
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wuwei_hello@163.com
1楼 2010-05-31 20:19:16
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conniejing

木虫 (初入文坛)
wuweibewin(金币+14, 博学EPI+1): 2010-06-06 21:26:03
我做的是植物的DNA（紫薇），分子量很大，我当时也做过直接加EB做的，两种方法都可以，如果你提的DNA是纯化的，那就不要担心，按正常的做，适当延长电泳时间就行，但是植物中的多糖多酚太多，很多粘性物质容易粘在DNA上，所以可以考虑降低凝胶浓度和延长电泳时间，减少加样量
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5楼2010-06-04 08:42:08
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conniejing

木虫 (初入文坛)
wuweibewin(金币+1): 2010-06-08 16:18:02
我用的是100伏的电压，凝胶浓度时0.6-0.8%，时间是一个半小时左右，其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出，就可以染色拍照了。
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2楼2010-05-31 20:40:22
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wuweibewin

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by conniejing at 2010-05-31 20:40:22:
我用的是100伏的电压，凝胶浓度时0.6-0.8%，时间是一个半小时左右，其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出，就可以染色拍照了。

以往我也用这种方法！但这种方法最多可以鉴定长度约为20kb的DNA，
你可以通过加入λ (Lambda) DNA（线状）和λ (Lambda)E（EcoR1） 比较就会发现，根本就不能用于大于20kb的DNA片段鉴定!!λ (Lambda) 约 位于 λ (Lambda)E（EcoR1）的 最有一条片段处 （20kb）处，实际上λ (Lambda)长为48.5KB！
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wuwei_hello@163.com
3楼2010-05-31 20:58:03
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wuweibewin

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by conniejing at 2010-05-31 20:40:22:
我用的是100伏的电压，凝胶浓度时0.6-0.8%，时间是一个半小时左右，其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出，就可以染色拍照了。

不过我们没有用那么长时间 ，一般我们只用40-50分钟左右即取出，且我们常常通过向胶内加EB，电泳完直接照相！
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wuwei_hello@163.com
4楼2010-05-31 21:00:43
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