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wuweibewin

金虫 (正式写手)

[交流] 利用琼脂糖凝胶电泳鉴定大于50Kb的植物DNA

利用琼脂糖凝胶电泳鉴定大于50Kb的植物DNA所需的条件:
说明电泳中  凝胶浓度、电泳电压、电泳时间等等实验条件即可!

谢绝教科书以及国产来源的资料及文献,要真实可靠的实验过程!
谢谢虫友不吝赐教!
wuwei_hello@163.com
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by conniejing at 2010-05-31 20:40:22:
我用的是100伏的电压,凝胶浓度时0.6-0.8%,时间是一个半小时左右,其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出,就可以染色拍照了。

以往我也用这种方法!但这种方法最多可以鉴定长度约为20kb的DNA,
你可以通过加入λ (Lambda) DNA(线状)和λ (Lambda)E(EcoR1) 比较就会发现,根本就不能用于大于20kb的DNA片段鉴定!!λ (Lambda) 约 位于 λ (Lambda)E(EcoR1)的 最有一条片段处 (20kb)处,实际上λ (Lambda)长为48.5KB!
wuwei_hello@163.com
3楼2010-05-31 20:58:03
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conniejing

木虫 (初入文坛)

wuweibewin(金币+1): 2010-06-08 16:18:02
我用的是100伏的电压,凝胶浓度时0.6-0.8%,时间是一个半小时左右,其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出,就可以染色拍照了。
2楼2010-05-31 20:40:22
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wuweibewin

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by conniejing at 2010-05-31 20:40:22:
我用的是100伏的电压,凝胶浓度时0.6-0.8%,时间是一个半小时左右,其实溴酚蓝跑出胶板后过半小时取出,就可以染色拍照了。

不过我们没有用那么长时间 ,一般我们只用40-50分钟左右即取出,且我们常常通过向胶内加EB,电泳完直接照相!
wuwei_hello@163.com
4楼2010-05-31 21:00:43
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conniejing

木虫 (初入文坛)

wuweibewin(金币+14, 博学EPI+1): 2010-06-06 21:26:03
我做的是植物的DNA(紫薇),分子量很大,我当时也做过直接加EB做的,两种方法都可以,如果你提的DNA是纯化的,那就不要担心,按正常的做,适当延长电泳时间就行,但是植物中的多糖多酚太多,很多粘性物质容易粘在DNA上,所以可以考虑降低凝胶浓度和延长电泳时间,减少加样量
5楼2010-06-04 08:42:08
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