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【求助】多糖纯化、检测及分子量测定 已有7人参与
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| 从软骨中提取出一种酸性粘多糖，想把这种粗多糖进一步纯化，利用三氯乙酸脱蛋白、葡聚糖凝胶柱层析，因实验室条件有限，打算用电泳法测多糖分子量。有几个问题请教：①三氯乙酸的浓度怎么选择？②层析流出物检测查到：天青Ⅰ法、硫酸咔唑法、硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法等。不知道哪种方法较适合？③测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适？标准品应该怎么选，？ |
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liu200479
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从软骨中提取出一种酸性粘多糖，想把这种粗多糖进一步纯化，利用三氯乙酸脱蛋白、葡聚糖凝胶柱层析，因实验室条件有限，打算用电泳法测多糖分子量。有几个问题请教：①三氯乙酸的浓度怎么选择？②层析流出物检测查到：天青Ⅰ法、硫酸咔唑法、硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法等。不知道哪种方法较适合？③测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适？标准品应该怎么选，？ 1酸性多糖最好用硫酸蒽酮法 2看看样品色素含量是否很高，如果色素和多糖结合在一起吸附在柱子上比较麻烦 3三氯乙酸会降解多糖，同一种浸膏用三氯乙酸法分离出来的样品就比sevag法少 4如果你的样品有颜色（非色素）自己会用眼睛看到差别 5测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适，这两种方法测出样品分子量的误差较大，建议用凝胶渗透色谱法测分子量， 你可以用样品从凝胶洗脱下来的保留体积估算分子量在哪个范围，但要记住色谱柱的保留体积是多少毫升 |
7楼2011-03-23 00:14:01