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lanlan_zhu

木虫 (著名写手)

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[交流] 求助翻译【糖化酶】英文文献一篇

一篇糖化酶的英文文献，急需，希望给位帮帮忙。

文献在邮箱里：guojiazainali@163.com 密码：123456789

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1楼 2010-05-29 10:30:10

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1214318xy

铁虫 (著名写手)

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lanlan_zhu(金币+430): 2010-05-31 19:38:44

分析方法
通过测量干重来判定生长情况，菌丝体过滤膜(Whatman no. 1)后干燥到恒重。菌体培养基过0.2um并储存在-20度。为了测液体培养基中的相对荧光强度，1.5ml的样品用带有508nm 散射过滤器的Hitachi 2000在490nm处激发。红移的重组GFP被用作对照。用标准的流程做SDS-PAGE(Sambrook et al., 1989)。按照Towbin描述（Towbin et al. (1979)）电转化蛋白至纤维素膜上。用1：500稀释的山羊抗兔抗体(Clontech)来免疫检测sGFP。用1：5000稀释的兔抗转化酶抗体（由Novo Nordisk慷慨提供）来免疫检测转化酶。为了研究sGFP被降解情况，7ug重组sGFP蛋白质与来源于对数期末期的140ul菌体培养物共培养达6小时。样品被间隔控制并做Western杂交验证。

突变并筛选分泌途径中突变体
N402菌株的孢子悬浮液（20ml，含有GLA499: : sGFP融合蛋白）进行紫外突变(UVP; model R-52G)，照射40s杀死95-99%孢子。突变孢子被涂布在修改的的Vogel培养基上（含有0.1%（w/v）葡萄糖和0.05%（v/v）Triton X-100），孢子的密度控制在25度下培养3天后，长出30-50个菌落。加入Triton X-100以控制菌落的生长。融化的Vogel淀粉培养基（含有1%（w/v）玉米淀粉，10ml）被小心的倒在含菌落的平板上并42度培养24小时。以前的研究表明在培养6到14小时时没有突变的菌落会产生可见的光环。培养24小时后仍不见光环的菌落挑到另一个含淀粉的平板上并在25和42度培养再筛选。来自第二次筛选的突变体的孢子悬浮液或者菌丝体棉塞（直径4mm）培养在Vogel’s gelatin培养基中（含有1%葡萄糖，1%（w/v）明胶，0.05%Triton X-100和不含硫酸铵）在25和42度分别培养4和2天。以前的研究已经表明不突变的菌落在25和42度分别培养18-24小时和6-14小时时会在菌落四周产生透明的区域。