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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

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Originally posted by 小白兄 at 2010-05-30 23:05:36:

有什么?阳性克隆吗?说清楚了还帮你解决。

做质粒的对照时,没有加片段及T4连接酶,说明我的质粒酶切不完全吗?电泳图看酶切质量还是可以的。
平和悦衲!
11楼2010-05-31 11:05:43
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小白兄

金虫 (小有名气)


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Originally posted by haoqian6135 at 2010-05-31 11:05:43:

做质粒的对照时,没有加片段及T4连接酶,说明我的质粒酶切不完全吗?电泳图看酶切质量还是可以的。

你是指跑胶的时候加质粒做对照了吗?
单切的质粒最终跑胶是在质粒两条带前面,但是开始一段时间是在质粒两条带之间的。
你的酶切完全是指单切只出现一条带?
你回复我中怎么还提到T4连接酶和片段,什么意思,没搞清楚。
时光如流水,匆匆而过。
12楼2010-05-31 12:15:47
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清水塘

木虫 (小有名气)


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看了你们的讨论,感觉很有收获,本人也在做这方面的实验。我的质粒载体大小为4Kb多,用XhoI单酶切后,连上一个3Kb的目的基因,试了很多次也没能连上,找出来的菌全是载体自连的。我也进行去磷酸化了,是不是去磷酸化效率太低了呢。
13楼2010-05-31 18:48:19
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

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Originally posted by haoqian6135 at 2010-05-31 11:05:43:

做质粒的对照时,没有加片段及T4连接酶,说明我的质粒酶切不完全吗?电泳图看酶切质量还是可以的。

非常感谢喽!实验出来了!
平和悦衲!
14楼2010-06-01 18:59:12
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

引用回帖:
Originally posted by 小白兄 at 2010-05-31 12:15:47:

你是指跑胶的时候加质粒做对照了吗?
单切的质粒最终跑胶是在质粒两条带前面,但是开始一段时间是在质粒两条带之间的。
你的酶切完全是指单切只出现一条带?
你回复我中怎么还提到T4连接酶和片段,什么意思, ...

去磷酸化同时也是降低了质粒的回收率,建议做一个质粒去磷酸的做一个质粒未去磷酸的。
平和悦衲!
15楼2010-06-01 19:00:29
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小白兄

金虫 (小有名气)


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Originally posted by haoqian6135 at 2010-06-01 19:00:29:

去磷酸化同时也是降低了质粒的回收率,建议做一个质粒去磷酸的做一个质粒未去磷酸的。

楼主引贴引错了吧?看到我好晕,是谢我吗?
时光如流水,匆匆而过。
16楼2010-06-01 22:57:49
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