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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】大家觉得这个结果怎么解释？
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大家觉得这个结果怎么解释？ 已有8人参与

最近PCR，电泳时发现除了目的带以外，多了一些不明条带，随着电泳时间的延长而逐渐减弱，直至消失。后来实验证实是loading buffer的问题。我用的buffer是takara随内切酶提供的10*buffer，向该公司反映后，该公司回复说是该buffer只能用于内切酶后电泳，不推荐用于PCR产物电泳，其解释是其中不明条带是SDS。
不知道大家碰到过这种情况没有？
详见下图，其中箭头标示的都是不明条带。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
1楼 2010-05-25 22:15:47
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by missu at 2010-05-26 11:03:06:
我觉得只要不影响你切胶和后面的实验就没什么大不了了
你的目的是PCR产物，过多关注这些问题没意义的

我觉得对一个严谨的实验过程来说，忽略这种现象没有好处。
今天这个东西可以忽略，说不定明天忽略的另一个问题会对后续实验造成严重后果。
而且发现这个现象也是在排除pcr和试剂污染的过程中发现的，一开始并没有怀疑到buffer上面来。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
13楼2010-05-26 14:18:10
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
snoopyzxx(金币+1):谢谢参与
始终觉得是pcr扩增的一些非特异性的条带，它们大小不一但是相差不是很大，随着电泳时间的加长，逐渐分开并扩大稀释，就看不到了；
居然还有这种原因（loading buffer的原因），没有想到过；
可是不加pcr产物的任何点都没有这条带啊
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-25 22:24:11
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
大家注意第一张图右边有各泳道的上样情况。
其中有三组对照实验，每组都有只有loading buffer的孔，只有loadingbuffer的孔里也有非目的带。
而且6、7、8、9是用的另一公司的作为对照，这一组里面没有不明条带。所以从这里我判断是loading buffer的问题。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
3楼2010-05-25 22:33:59
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
以下为上面图片的较清晰版。
分别对应上面的图。




[ Last edited by snoopyzxx on 2010-5-25 at 22:41 ]
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2010-05-25 22:39:07
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