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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】间接E L I S A法如何测抗血清的效价？
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liushuai7333

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】间接E L I S A法如何测抗血清的效价？ 已有3人参与

正在做间接竞争酶联免疫的实验，看文献要测自制抗血清的效价，有双向免疫扩散法和酶联免疫法，请问免疫扩散法如何测啊?最好详细点，谢谢
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1楼 2010-05-22 09:43:44
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yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
liushuai7333(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2):热心虫友~~ 2010-05-22 14:08:18
liushuai7333(金币+9): 2010-05-22 15:13:39
给个网站去看下
http://jpk.hlju.edu.cn/reply.asp?id=26726，免疫双扩散很简单的，
还有你可以用间接ELISA法测效价
将抗原按一定浓度包被酶标板，将血清进行稀释，作为样本加入孔中，温育后加入一定浓度的酶标二抗，温育后洗板，加底物显色，检测450NM的吸光度值，以吸光定值是空白值2倍的稀释度作为效价。
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专注、专心、专业
2楼2010-05-22 10:19:57
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liushuai7333

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-05-22 10:19:57:
给个网站去看下
http://jpk.hlju.edu.cn/reply.asp?id=26726，免疫双扩散很简单的，
还有你可以用间接ELISA法测效价
将抗原按一定浓度包被酶标板，将血清进行稀释，作为样本加入孔中，温育后加入一 ...

谢谢，你说的一定浓度是怎么确定的啊？看文献吗？还有效价的表示方法1：xxx是血清稀释度的意思吗？空白对照用正常的小鼠血清是吧，也和抗血清一样稀释相同的倍数吗？问题有点多，非常感谢你，没什么报答的，给些金币吧，以后有问题还望不吝赐教。再次感谢！
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3楼2010-05-22 15:13:09
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yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-22 17:20:38
浓度主要根据分子大小以及经验，空白可以直接什么都不加，血清一般倍比稀释，说效价一定要说哪种方法测的才有意义。
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专注、专心、专业
4楼2010-05-22 17:12:35
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liushuai7333

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-05-22 17:12:35:
浓度主要根据分子大小以及经验，空白可以直接什么都不加，血清一般倍比稀释，说效价一定要说哪种方法测的才有意义。

如果我用酶联免疫法测血清的效价，1：xxxx表示什么意思啊？谢谢
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5楼2010-05-22 22:16:25
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richujs

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yaojc at 2010-05-22 10:19:57:
给个网站去看下
http://jpk.hlju.edu.cn/reply.asp?id=26726，免疫双扩散很简单的，
还有你可以用间接ELISA法测效价
将抗原按一定浓度包被酶标板，将血清进行稀释，作为样本加入孔中，温育后加入一 ...

不同显色液吸收波长不一样，TMB显色液终止后用的是450nm
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思想是能力和力量的源泉
6楼2010-05-23 09:05:46
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liushuai7333

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by richujs at 2010-05-23 09:05:46:

不同显色液吸收波长不一样，TMB显色液终止后用的是450nm

恩，是这样，谢谢。另外在用方阵滴定法测包被抗原和抗血清的最佳工作浓度的时候是不是不加竞争抗原，直接加酶标二抗就行啊？我的理解是这样，然后取吸光度在1.0左右的浓度。这样在加入竞争抗原的时候吸光度肯定小于1，吸光度小于1应该是比较敏感的范围吧？
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7楼2010-05-23 10:40:05
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