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1970-01-01 08:00:00
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lzhwin

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那你是不是应该改良克隆的系统?克隆基因片段已经有很成熟而且很快速的解决方法了。除非你有上百个片段一次实验做不过来。一般十个以内的片段扩增以及鉴定应该能在10天以内完成。细算一下(最长时间):
合成引物:5天
PCR+电泳+胶回收+加A+连T载:12小时
转化大肠杆菌并培养:16小时
菌落PCR鉴定+液体培养阳性菌落:16小时
提质粒+酶切鉴定:5小时
测序:3天
合计约10天
合成引物我们一般3天  测序大概2天  
拓扑异构酶T载快速连接试剂盒可以再节省半天时间并且显著提高阳性率
况且你不需要合成引物了。

所以,究竟哪里浪费了你的时间?
重叠突变也需要重新设计引物,无论怎样突变比你单扩增片段要麻烦的多
14楼2010-05-19 22:44:45
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jasco

木虫 (正式写手)


yinsongna(金币+1): 2010-05-19 11:29:52
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 18:54:53
突变试剂盒,或者突变处合成引物,通过串联pcr修复,

最简单的是重新扩增
2楼2010-05-19 11:27:07
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yinsongna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-19 11:27:07:
突变试剂盒,或者突变处合成引物,通过串联pcr修复,

最简单的是重新扩增

重新合成太费劲了 突变试剂盒貌似很贵,麻烦你可不可以给我说下突变处合成引物,是不是就是在突变的地方设计引物,然后重叠延伸PCR再做链接?
3楼2010-05-19 11:31:19
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lzhwin

木虫 (正式写手)

yinsongna(金币+1): 2010-05-19 12:43:49
不懂,既然是扩增突变,说明模板应该没问题吧?
重新扩一次不就行了
4楼2010-05-19 11:33:07
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