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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】已知基因序列如何克隆获得
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by changes at 2010-05-13 23:59:01:

现在建一个cDNA全长文库公司做的话是3万左右吧。
我觉得文库的优点是你可以通过后续的筛库（杂交或同源克隆等）的策略克隆得到你想要的一类基因（可能许多个同源基因），至于是否是全长呢，一是看你的基因大小 ...

多谢了，我会参考的！
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11楼2010-05-14 07:38:01
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用软件设计吧，尽量符合原则就行，引物设计就是个经验，能不能跑出来还得看运气了
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12楼2010-05-14 08:53:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:31:23:

关键是头和尾的引物怎么设计都不符合原则，老板说可以随便加几个碱基，只要符合设计原则就行，您觉得可行吗？就用一般的PCR做的出来吗？谢谢！

只要酶是强大的，原则就不是原则了
能扩出来就好，不是么~
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13楼2010-05-14 10:16:24
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-14 16:40:54
引用回帖:
Originally posted by changes at 2010-05-13 23:59:01:

现在建一个cDNA全长文库公司做的话是3万左右吧。
我觉得文库的优点是你可以通过后续的筛库（杂交或同源克隆等）的策略克隆得到你想要的一类基因（可能许多个同源基因），至于是否是全长呢，一是看你的基因大小 ...

不要那么死板，不符合设计原则的引物并不一定就扩不出来东西的，试了才知道，有的时候啥都符合还扩不出来结果呢。如果实在找不到合适的引物就取一前一后的位置来设计引物就行。但GC含量不能差太多。
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14楼2010-05-14 16:28:49
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
完全可以啊，只要你已经知道你的基因并且确定没有变异

PCR最初的时候，就是这个意思啊
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:34:45:

请问这个用一般的PCR能扩出来吗？不用做RACE吧？

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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
15楼2010-05-14 17:04:14
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xjzw

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
852684楼: Originally posted by zcqcau at 2010-05-13 23:55:01
如果已经有人知道全长了，那你就直接克隆开放阅读框就可以了啊！！非编码区你克隆了也没有什么意思啊

那个你说的非编码区也是指的是UTR吧，那个5‘UTR是核糖体的结合位点，应该要克隆的吧，不然基因最后的表达怎么进行？
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16楼2013-01-06 23:30:03
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by changes at 2010-05-13 22:08:50
有cDNA全长文库的话就好了，现在大家怎么都喜欢做RACE呢，构建个文库不更好吗？效率高，一个实验室都可用。

生手弱弱地问一句，哪个价钱低点啊？
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思路决定出路。。。
17楼2013-06-13 23:45:15
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changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-06-13 23:45:15
生手弱弱地问一句，哪个价钱低点啊？...

现在clontech的RACE试剂盒大约8000。不买试剂盒，自己也可以做RACE试试，最关键的是设计引物。5' RACE和3' 的都可以自己试试。
论坛里有许多牛人自己做RACE挺好的，你可以搜索看看。
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18楼2013-06-14 21:52:03
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by changes at 2013-06-14 21:52:03
现在clontech的RACE试剂盒大约8000。不买试剂盒，自己也可以做RACE试试，最关键的是设计引物。5' RACE和3' 的都可以自己试试。
论坛里有许多牛人自己做RACE挺好的，你可以搜索看看。...

谢谢
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思路决定出路。。。
19楼2013-06-14 23:54:02
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