24小时热门版块排行榜    

查看: 2400  |  回复: 18

xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by changes at 2010-05-13 23:59:01:

现在建一个cDNA全长文库公司做的话是3万左右吧。
我觉得文库的优点是你可以通过后续的筛库(杂交或同源克隆等)的策略克隆得到你想要的一类基因(可能许多个同源基因),至于是否是全长呢,一是看你的基因大小 ...

多谢了,我会参考的!
11楼2010-05-14 07:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用软件设计吧,尽量符合原则就行,引物设计就是个经验,能不能跑出来还得看运气了
12楼2010-05-14 08:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:31:23:

关键是头和尾的引物怎么设计都不符合原则,老板说可以随便加几个碱基,只要符合设计原则就行,您觉得可行吗?就用一般的PCR做的出来吗?谢谢!

只要酶是强大的,原则就不是原则了
能扩出来就好,不是么~
13楼2010-05-14 10:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-14 16:40:54
引用回帖:
Originally posted by changes at 2010-05-13 23:59:01:

现在建一个cDNA全长文库公司做的话是3万左右吧。
我觉得文库的优点是你可以通过后续的筛库(杂交或同源克隆等)的策略克隆得到你想要的一类基因(可能许多个同源基因),至于是否是全长呢,一是看你的基因大小 ...

不要那么死板,不符合设计原则的引物并不一定就扩不出来东西的,试了才知道,有的时候啥都符合还扩不出来结果呢。如果实在找不到合适的引物就取一前一后的位置来设计引物就行。但GC含量不能差太多。
14楼2010-05-14 16:28:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
完全可以啊,只要你已经知道你的基因并且确定没有变异

PCR最初的时候,就是这个意思啊
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 07:34:45:

请问这个用一般的PCR能扩出来吗?不用做RACE吧?

将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
15楼2010-05-14 17:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjzw

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
852684楼: Originally posted by zcqcau at 2010-05-13 23:55:01
如果已经有人知道全长了,那你就直接克隆开放阅读框就可以了啊!!非编码区你克隆了也没有什么意思啊

那个你说的非编码区也是指的是UTR吧,那个5‘UTR是核糖体的结合位点,应该要克隆的吧,不然基因最后的表达怎么进行?
16楼2013-01-06 23:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by changes at 2010-05-13 22:08:50
有cDNA全长文库的话就好了,现在大家怎么都喜欢做RACE呢,构建个文库不更好吗?效率高,一个实验室都可用。

生手弱弱地问一句,哪个价钱低点啊?
思路决定出路。。。
17楼2013-06-13 23:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-06-13 23:45:15
生手弱弱地问一句,哪个价钱低点啊?...

现在clontech的RACE试剂盒大约8000。不买试剂盒,自己也可以做RACE试试,最关键的是设计引物。5' RACE和3' 的都可以自己试试。
论坛里有许多牛人自己做RACE挺好的,你可以搜索看看。
18楼2013-06-14 21:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by changes at 2013-06-14 21:52:03
现在clontech的RACE试剂盒大约8000。不买试剂盒,自己也可以做RACE试试,最关键的是设计引物。5' RACE和3' 的都可以自己试试。
论坛里有许多牛人自己做RACE挺好的,你可以搜索看看。...

谢谢
思路决定出路。。。
19楼2013-06-14 23:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoru2010 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见