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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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deusrwaf

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶液解冻后会有沉定,这是为什么。 已有4人参与

问题如题:我是用PH7.2的PBS提取黄瓜叶片的蛋白,放在-40度的冰箱里,第二天拿出离心解冻或者放在冰上解冻往往会有沉淀产生。不知道这是蛋白还是别的什么?请高手指教啊?我们实验室别的组提拟南芥或者水稻都没有这事。
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deusrwaf

铁虫 (小有名气)

静待高手出现啊
2楼2010-05-13 19:14:25
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是蛋白变性哦,不同蛋白质可能稳定性不同,变性条件不同···
Flytothesky```
3楼2010-05-13 20:41:43
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deusrwaf

铁虫 (小有名气)

那楼上有没有稳定的PH缓冲液推荐?HEPES行不行。正在测解冻后的浓度,比较解冻前的看沉淀是不是蛋白质。我是用PBS直接磨黄瓜叶 片,然后离心再吸取上清液冷冻的。
4楼2010-05-13 21:20:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)


煮煮,再让他复性
5楼2010-05-14 11:51:21
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
先离心,收集沉淀、上清跑胶看看沉淀是不是你的目的蛋白,上清中还有没有目的蛋白。
沉淀是你的目的蛋白:
1、 考虑能不能加入底物、复合物等稳定蛋白性质;
2、提高Buffer盐的浓度;
3、液氮速冻,冰上融化。
尝试吧,我的蛋白原来一冻就沉,现在好了。
6楼2010-05-14 12:13:31
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