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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有用pfu的吗，求教
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用Taq没有问题的话。干吗要用PFU呢，奇怪·你怎么就知道会突变～
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21楼2010-05-11 14:37:39
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miya173

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by liyong1981 at 2010-05-11 14:37:39:
用Taq没有问题的话。干吗要用PFU呢，奇怪·你怎么就知道会突变～

对，taq突变时有一定频率的，不一定要用高保真的酶，再说你的片段又很短。
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22楼2010-05-11 14:41:24
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陈思容

铜虫 (正式写手)
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Originally posted by miya173 at 2010-05-11 12:19:24:

试试用温度梯度来扩增看看？

试过了
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23楼2010-05-11 15:24:55
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by miya173 at 2010-05-11 14:41:24:

对，taq突变时有一定频率的，不一定要用高保真的酶，再说你的片段又很短。

那个我要P 6kp的基因
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24楼2010-05-11 15:25:51
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-11 10:48:16:


如果真想换酶的用phusion吧，前提是该酶异常贵，我从TB里面都能把稀有基因给P出来。

太贵了，得考虑考虑
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25楼2010-05-11 15:27:11
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by 陈思容 at 2010-05-11 09:50:13:

62%,我都是升到95°才放上去的，预变性3min,变性30s

我的GC含量高的时候都用的GC buffer,你可以试试
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26楼2010-05-11 17:57:12
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lingn

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PFU+tag
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27楼2010-05-11 20:37:37
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muchongchong838

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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28楼2010-05-11 20:54:31
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muchongchong838

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
29楼2010-05-11 20:54:53
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-05-11 14:37:39:
用Taq没有问题的话。干吗要用PFU呢，奇怪·你怎么就知道会突变～

我们实验室构建师姐当时用taq plus，转化后存质粒，后来发现TAG突变为TGG,
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30楼2010-05-11 21:32:00
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