应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有用pfu的吗，求教
332/4返回列表上一页1234下一页
查看: 1589  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。
赞一下 回复此楼
For my life！
11楼2010-05-10 21:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用extag或者LAtag
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2010-05-10 21:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2010-05-10 21:51:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-05-10 21:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-10 20:31:49:
是不是GC含量太高了

62%,我都是升到95°才放上去的，预变性3min,变性30s
赞一下 回复此楼
15楼2010-05-11 09:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:26:17:
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。

这样也可以吗？但是buffer呢，用那个酶的buffer
赞一下 回复此楼
16楼2010-05-11 09:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-10 21:51:39:
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧

为啥降温？
回复此楼
17楼2010-05-11 09:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2010-05-10 21:57:00:
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样
赞一下 回复此楼
18楼2010-05-11 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-11 09:53:04:

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样

如果真想换酶的用phusion吧，前提是该酶异常贵，我从TB里面都能把稀有基因给P出来。
赞一下(1人) 回复此楼
For my life！
19楼2010-05-11 10:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miya173

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-10 19:50:03:

我试过提高到68，结果连二聚体也没了，跑胶一片空白，唉

试试用温度梯度来扩增看看？
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2010-05-11 12:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈思容 的主题更新
332/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +17 大米饭！ 2026-03-15 21/1050 2026-03-21 19:18 by ColorlessPI
[考研] 0703化学 305求调剂 +5 FY_yy 2026-03-14 5/250 2026-03-21 19:00 by ColorlessPI
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +4 一瓶苯甲酸 2026-03-14 4/200 2026-03-20 20:36 by fen_rao
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 3/150 2026-03-20 11:58 by 呱呱呱呱叫
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭