应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有用pfu的吗，求教
332/4返回列表上一页1234下一页
查看: 1491  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。
赞一下 回复此楼
For my life！
11楼2010-05-10 21:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用extag或者LAtag
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2010-05-10 21:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2010-05-10 21:51:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-05-10 21:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-10 20:31:49:
是不是GC含量太高了

62%,我都是升到95°才放上去的，预变性3min,变性30s
赞一下 回复此楼
15楼2010-05-11 09:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:26:17:
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。

这样也可以吗？但是buffer呢，用那个酶的buffer
赞一下 回复此楼
16楼2010-05-11 09:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-10 21:51:39:
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧

为啥降温？
回复此楼
17楼2010-05-11 09:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2010-05-10 21:57:00:
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样
赞一下 回复此楼
18楼2010-05-11 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-11 09:53:04:

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样

如果真想换酶的用phusion吧，前提是该酶异常贵，我从TB里面都能把稀有基因给P出来。
赞一下(1人) 回复此楼
For my life！
19楼2010-05-11 10:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miya173

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-10 19:50:03:

我试过提高到68，结果连二聚体也没了，跑胶一片空白，唉

试试用温度梯度来扩增看看？
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2010-05-11 12:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈思容 的主题更新
332/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭