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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。
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For my life！
11楼2010-05-10 21:26:17
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螺旋技术

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用extag或者LAtag
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12楼2010-05-10 21:27:34
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧
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13楼2010-05-10 21:51:39
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gandalf886

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做
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14楼2010-05-10 21:57:00
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-10 20:31:49:
是不是GC含量太高了

62%,我都是升到95°才放上去的，预变性3min,变性30s
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15楼2010-05-11 09:50:13
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:26:17:
给你说个秘方哈，Taq和Pfu混合，保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你，现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。

这样也可以吗？但是buffer呢，用那个酶的buffer
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16楼2010-05-11 09:51:17
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-10 21:51:39:
我也觉得用EXTaq更方便一些，保真性也不错。
另外，楼主升温肯定不合理，降温试试吧

为啥降温？
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17楼2010-05-11 09:51:58
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陈思容

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2010-05-10 21:57:00:
换酶，extaq，KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA，如果是的话用保真酶就比较难做

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样
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18楼2010-05-11 09:53:04
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-11 09:53:04:

我的模板是gDNA，且胶回收过的，模板污染的问题应该不存在，ex taq的保真性怎么样

如果真想换酶的用phusion吧，前提是该酶异常贵，我从TB里面都能把稀有基因给P出来。
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For my life！
19楼2010-05-11 10:48:16
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miya173

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-10 19:50:03:

我试过提高到68，结果连二聚体也没了，跑胶一片空白，唉

试试用温度梯度来扩增看看？
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20楼2010-05-11 12:19:24
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