24小时热门版块排行榜    

查看: 1491  |  回复: 32

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客

给你说个秘方哈,Taq和Pfu混合,保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你,现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。
For my life!
11楼2010-05-10 21:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

螺旋技术

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用extag或者LAtag
12楼2010-05-10 21:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也觉得用EXTaq更方便一些,保真性也不错。
另外,楼主升温肯定不合理,降温试试吧
13楼2010-05-10 21:51:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换酶,extaq,KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA,如果是的话用保真酶就比较难做
14楼2010-05-10 21:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-10 20:31:49:
是不是GC含量太高了

62%,我都是升到95°才放上去的,预变性3min,变性30s
15楼2010-05-11 09:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:26:17:
给你说个秘方哈,Taq和Pfu混合,保证质量的同时提高产率。
还有悄悄告诉你,现在很多所谓高效保真的扩增酶就是这么搞的。具体的比例自己去摸吧。

这样也可以吗?但是buffer呢,用那个酶的buffer
16楼2010-05-11 09:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-10 21:51:39:
我也觉得用EXTaq更方便一些,保真性也不错。
另外,楼主升温肯定不合理,降温试试吧

为啥降温?
17楼2010-05-11 09:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by gandalf886 at 2010-05-10 21:57:00:
换酶,extaq,KOD plus等
你的模板是不是基因组DNA,如果是的话用保真酶就比较难做

我的模板是gDNA,且胶回收过的,模板污染的问题应该不存在,ex taq的保真性怎么样
18楼2010-05-11 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-11 09:53:04:

我的模板是gDNA,且胶回收过的,模板污染的问题应该不存在,ex taq的保真性怎么样

如果真想换酶的用phusion吧,前提是该酶异常贵,我从TB里面都能把稀有基因给P出来。
For my life!
19楼2010-05-11 10:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miya173

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-05-10 19:50:03:

我试过提高到68,结果连二聚体也没了,跑胶一片空白,唉

试试用温度梯度来扩增看看?
20楼2010-05-11 12:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈思容 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见