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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带! 已有17人参与

我想请问一下,我最近做PCR反应的时候怎么就没有目的基因片段产物???
是不是以下条件出问题了?

1)退火温度
2)引物浓度
3)模板浓度
4)dNTP浓度
5)Taq PlusI 聚合酶浓度
6)10X PCR buffer.

dNTP、Taq Plus聚合酶、10X PCR buffer 都是新的,剩下第一和第二的因素,
我想请问的是我一直P不出条带出来,是不是引物或者模板的问题??
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csx2044

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢回帖交流~~ 2010-05-08 17:42:25
主要原因要么是引物设计问题,要么是模板量的问题,建议:1提取的RNA测定浓度、纯度及完整性(从而保证模板没有问题);2重新设计一对引物,直接在网上设计(普通PCR引物用NCBI;实时定量PCR引物用ROCHE设计)
我为虫虫,虫虫为我
11楼2010-05-08 17:24:36
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keeperw

捐助贵宾 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很有可能是引物的原因,最主要两条:3’端特异性要有保证;退火温度要一致
2楼2010-05-08 14:51:14
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todouhy

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
再次检查一下自己的引物是否设计合理,各个组分的浓度!
3楼2010-05-08 14:56:54
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
p不出来,一般就是引物问题,引物之前如果没有做过,那一般就是引物问题。但是模板也不容忽视,模板质量和浓度也要注意
4楼2010-05-08 15:03:01
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