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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】跪求反转录失败的原因
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xuejinyz1

铜虫 (初入文坛)

跪求反转录失败的原因

reasonspare:比如真核生物RNA 用actin作参比，微生物用16S 或者其他保守基因。 2010-05-13 06:35:00
我是用试剂盒里的内参来做的，内参的条带是很好的。不知道您的意思是，用我自己提取的rna为模板来做内参，还是什么的。
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11楼2010-05-12 10:49:03
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lzf0411

新虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-05-13 06:35:30
我个人觉得好像是退火温度有点低，要不然就是胶做的有问题。
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12楼2010-05-12 13:56:02
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pidou213

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-05-13 06:35:37
RNA的问题
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见得多爱的多
13楼2010-05-12 23:33:08
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
scelab(金币+2):bb很多了现在 2010-09-02 22:57:42
引用回帖:
Originally posted by xuejinyz1 at 2010-05-10 08:57:23:
我用oligo dT做反转录引物的，

看吧，我还是一下子抓到问题关键
总RNA、mRNA用oligo dT逆转录的cDNA拿来跑电泳必然是smear一片，你可以想想为什么……
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14楼2010-05-13 12:47:44
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mxb2008

木虫 (著名写手)

我也说两句

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-02 22:57:50
我们做的是相同的。一，你的模板不好，有DNA污染；有多糖或酚或少量蛋白污染，很可能是多糖污染；二，考虑你要扩的基因，对它的一些性质有所了解，如，你要扩的长度，该基因是否有polyA；三，建议你做反转录用下游引物试试。
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15楼2010-09-02 22:04:09
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lishenchi

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
721329楼: Originally posted by lixg at 2010-05-10 11:36:19
建议先用RNA为模板，扩一下内参，看有没有基因组DNA污染。如有，现用无RNA酶的DNA酶处理一下你的RNA样品，再做反转录。

前辈，请教一下，为什么基因组DNA污染会对结果产生影响呀？不是反而多了点模板吗？？
怎样避免提RNA的时候提到了DNA呢？？
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16楼2012-07-19 18:32:12
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sunshk

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
循环数太多，一般不要超过30，如果你觉得cDNA不够，可以把得到的pcr产物做模板再跑
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17楼2014-07-05 22:32:59
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