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hongrunge

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 蓝粉笔 at 2010-05-05 14:26:07:
你测序送样为PCR产物时,所得到的结果里不会有PCR扩增引物序列的,因为现在测序使用的原理都是SANGER测序法:使用带有荧光的dNTP及ddNTP进行链延长,电泳记录信号,引物上是没有荧光信号的,所以结果上是看不到引 ...

正解
11楼2010-05-06 11:47:14
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姜大磊

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 蓝粉笔 at 2010-05-05 14:48:27:
你测序送样为PCR产物时,所得到的结果里不会有PCR扩增引物序列的,因为现在测序使用的原理都是SANGER测序法:使用带有荧光的dNTP及ddNTP进行链延长,电泳记录信号,引物上是没有荧光信号的,所以结果上是看不到引 ...

楼上的说的同样解决了我的问题的一部分。我借助宝地也问个问题吧:我的电泳条带是1600多的,送去测序的时候,测了两个反应的,但是每一个反应给我的结果都是1100左右,这样加起来就2000多bp了,我该怎么找出的要的那个1600的序列啊,,谢谢大侠指教。
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
12楼2010-05-06 12:08:17
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nklyw

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
肯定有的
13楼2010-05-06 12:33:16
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蓝粉笔

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 姜大磊 at 2010-05-06 12:08:17:

楼上的说的同样解决了我的问题的一部分。我借助宝地也问个问题吧:我的电泳条带是1600多的,送去测序的时候,测了两个反应的,但是每一个反应给我的结果都是1100左右,这样加起来就2000多bp了,我该怎么找出的要 ...

接我的上文:每次测序结果开头的20bp左右是不太可信的,而且没有引物那段,所以想要把PCR产物测全就要双向测序,用拼接软件把双向结果拼接起来得到全长。
大家都希望每次测序是尽可能的长,但是后面很多是不可信的了,一般600bp,好的能到800bp,这要具体分析。双向测出来的结果是有重合区域的,所以不是1100+1100=2200,而是拼接后的序列,因为不管怎样是不会超出PCR产物的长度的。
希望对大家有帮助,我做过一段时间测序,如果有问题可以再问,尽我所能告诉大家。
14楼2010-05-06 16:41:13
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该不会
望大家都各有所获!
15楼2010-05-06 16:50:53
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biochem301

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
必须地,一定要测出引物序列,不然怎么知道你的序列从什么地方开始
16楼2010-05-06 17:12:19
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海鸥dede

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
肯定有引物序列的,你确定你的序列主要是先删掉引物序列,然后再在网上进行比对
17楼2012-04-10 09:16:01
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