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王珊珊1987

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】询问菌种保存及培养问题 已有8人参与

我现在购买了白色念珠菌,黑曲霉,生孢梭菌,枯草芽孢杆菌的菌种,是斜面的。(我们是打算做微生物限度检查。)听说只能活1个月左右。所以我们现在要保存起来。请问应该用什么方面保存,用什么培养基?

而且我们的菌种是3代的了。要求使用时不超过5代。如果我现在用纸片保存,那么经过传到平板后保存的是4代的,对吗?如果以后使用,是不是必须还要在接种到平板上?那么是不是我使用的就只能是5代了?
有没有好点的方法,使我使用时是4代呢?
谢谢大家
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jingcp200320

银虫 (小有名气)


lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-04-21 18:45
你可以将买来的斜面直接保存,到用的时候也不会死掉。  到时候不就是4代了么!  然后你再划一个斜面保存,以防万一。
2楼2010-04-21 17:24:51
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王珊珊1987

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-04-21 17:24:51:
你可以将买来的斜面直接保存,到用的时候也不会死掉。  到时候不就是4代了么!  然后你再划一个斜面保存,以防万一。

可是我现在还不知道什么时候使用,必须要保存起来啊。万一我一个月后用呢,到时候菌不都死了吗
3楼2010-04-21 17:30:58
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

★ ★
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lstt09nk(金币+1):热心虫友~~ 2010-04-21 18:45
可以用新鲜斜面培养基活化一代,那样你的所谓三代/五代就可以从头计算了!另外你可以用新鲜液体培养基培养单菌落后,离心收集菌体,然后用含有10%甘油的新鲜培养基悬浮起来,分装,就可以保存在零下80度,几年都没问题!当然所有这些操作都要严格无菌操作!!!
大家共同交流、共同提高!!!
4楼2010-04-21 18:36:44
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yushanyou12

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):good idea! 2010-04-22 11:46
我以前就是药厂做微生物的,限度无菌都做,使用的菌也就是你说的那些,不过还有些其他的菌

给你讲讲我们使用的菌种保藏吧,很省钱的哦,也符合药监局检查时的标准。

我们一般用到大肠杆菌,金葡菌,黑曲霉,白色念珠球菌,生孢梭菌,枯草芽孢等,我们的目的是保藏一年,标准是买进时是第二、三代,使用时不超过第五代。

方法:普通冰箱0度一下冷藏。先把买回来的二代菌在相应的培养基中培养分离,观察菌落形态和做革兰氏染色,确定是我们所需要的菌后,再事先准备好半固体琼脂小管,接着用接种环挑取菌落穿刺接种于琼脂的斜面及高层,然后在覆盖上事先准备好的灭过菌并干燥过的液体石蜡,约1CM。就可以冷藏了,有效期一年。

一般是制备12支,然后要用时在取出一支活化后划线接种于琼脂斜面,培养24小时候,冷藏在冰箱里,有效期一月,这个制备4支。这样就能保证每周都有菌用了,使用时是第四代或第五代。

如果你的是第三代想用第四代的话,就可以把买回来的菌斜面跳过平板划线形态及革兰氏检查(正规渠道买的菌一般还是可靠的),直接做半固体穿刺接种以后用液体石蜡封起来后冷藏(多做几支)。使用时再活化后划线于营养琼脂斜面,培养24小时,这时就可以挑取菌落使用了(第四代),有效期一个月(这个斜面制备4支冷藏,那么就可以每周使用一支了)。也就是说你的石蜡管做了几支就可以用几个月,但最多是一年。

[ Last edited by yushanyou12 on 2010-4-22 at 09:19 ]
今夜的寂寞,让我如此美丽。
5楼2010-04-22 09:17:16
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王珊珊1987

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yushanyou12 at 2010-04-22 09:17:16:
我以前就是药厂做微生物的,限度无菌都做,使用的菌也就是你说的那些,不过还有些其他的菌

给你讲讲我们使用的菌种保藏吧,很省钱的哦,也符合药监局检查时的标准。

我们一般用到大肠杆菌,金葡菌,黑曲霉 ...

我们这经常用的是牛奶和纸片保存法,可以吗?另外白色念珠菌,黑曲霉,生孢梭菌,枯草芽孢杆菌的培养基是什么啊
6楼2010-04-22 13:17:34
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白水龙·han

铜虫 (正式写手)


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PDA或者麦芽汁培养基都可以的
7楼2010-04-22 15:05:59
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sdlylxa

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
先接平板,单菌落再弄斜面,然后甘油保存,操作生物实验应该有,自己看
8楼2010-05-14 20:19:17
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zhangjiewtt

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
活化后甘油保存 (若干)   每次都重新接斜面(若干)  用完一个在接另一个甘油管
9楼2010-05-14 21:14:36
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ajsun

木虫 (小有名气)

最好每个菌都做一批甘油管,有条件的话,做一下安瓿管。斜面传代不可取!
10楼2010-05-19 20:44:05
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