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yf-deng

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】TaKaRa PrimeScript Reverse Transcriptase--如何组装5RACE试剂盒? 已有3人参与

大家好!最近我要做5RACE,请问大家有没有用过TaKaRa的PrimeScript Reverse Transcriptase(200 U/μl)反转录酶,刚问了销售人员说该酶可单独买做5RACE,但还有以下疑问:
1、说明书中并没有讲该酶有反转录至5端加一段引物的功能,另外所给的反转录体系中也没有出现5端加尾引物。
2、如果该酶有5端加尾活性,自己单独配制加尾引物的话碱基个数是否有限制?可否直接用Clotech的5 adaptor
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3'?哪位战友自己配过引物的可否分享?谢谢!
3、是不是只要合成一个加尾引物即可(就是加尾引物与后来做RACE的引物一样)?
望用过该酶的战友分享一下经验,不在老板实验室了,做实验得尽可能节省经费,望大家赐教!祝大家实验顺利!
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yf-deng

金虫 (正式写手)

现在工作了要尽可能节省经费没办法啊。。。。。。。。。。。。。
4楼2010-04-21 11:13:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-04-20 22:08
这只是个反转录酶,引物需要你自己提供,建议你买试剂盒,如果不买盒子,起码按照盒子的配方买齐所有药品,clontech RACE SMART盒子所有试剂都是公开的,可以自己买东西来做,我听说很多实验室都是自己配齐的东西,但是SMART的效果不如SMARTer,尤其是低峰度基因,不过SMARTer的5RACE接头有3‘端的5个碱基是保密的
2楼2010-04-20 21:46:09
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pangzio

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
5‘ RACE还是不要做了,换方法
5楼2010-04-21 14:41:45
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yf-deng at 2010-04-21 11:12:32:
谢谢于师姐!

哈哈,当初都是你指导我做RACE,现在我来告诉你,要知道是你我还真不好意思,我是不是有点班门弄斧了啊
6楼2010-04-21 17:04:03
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