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yf-deng

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】TaKaRa PrimeScript Reverse Transcriptase--如何组装5RACE试剂盒？已有3人参与

大家好！最近我要做5RACE，请问大家有没有用过TaKaRa的PrimeScript Reverse Transcriptase（200 U/μl）反转录酶，刚问了销售人员说该酶可单独买做5RACE，但还有以下疑问：
1、说明书中并没有讲该酶有反转录至5端加一段引物的功能，另外所给的反转录体系中也没有出现5端加尾引物。
2、如果该酶有5端加尾活性，自己单独配制加尾引物的话碱基个数是否有限制？可否直接用Clotech的5 adaptor
5'–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3'？哪位战友自己配过引物的可否分享？谢谢！
3、是不是只要合成一个加尾引物即可(就是加尾引物与后来做RACE的引物一样)?
望用过该酶的战友分享一下经验，不在老板实验室了，做实验得尽可能节省经费，望大家赐教！祝大家实验顺利！

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1楼 2010-04-20 21:31:16

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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专业: 疫苗学

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-04-20 22:08

这只是个反转录酶，引物需要你自己提供，建议你买试剂盒，如果不买盒子，起码按照盒子的配方买齐所有药品，clontech RACE SMART盒子所有试剂都是公开的，可以自己买东西来做，我听说很多实验室都是自己配齐的东西，但是SMART的效果不如SMARTer，尤其是低峰度基因，不过SMARTer的5RACE接头有3‘端的5个碱基是保密的