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【求助/交流】ELISA失败的原因
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wzw025
铜虫
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专业: 生物制药
[交流]
【求助/交流】ELISA失败的原因
已有4人参与
最近正在建立检测猪肺炎支原体抗原与抗体的ELISA方法,可是总是失败,请教各位专家真心指点一下,ELISA失败主要有哪些原因呢?需要从哪些方面着手突破呢?谢谢!不希望有灌水哦,(*^__^*)
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1楼
2010-04-20 00:03:30
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小周
铁杆木虫
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注册: 2009-01-05
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专业: 抗体工程学
先做棋盘试验吧!
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5楼
2010-04-21 17:47:45
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liyong1981
金虫
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帖子: 905
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虫号: 357405
注册: 2007-04-27
性别: GG
专业: antibody
你什么都没说,让人怎么帮助你?受不了
使你失败的原因有10的N次方计,请说你怎么做的,加上自己的分析,谢谢
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2楼
2010-04-20 16:32:55
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xfq1212
铜虫
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虫号: 933641
注册: 2009-12-26
性别:
MM
专业: 蛋白质组学
★ ★ ★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-04-21 18:11
ELISA的试剂加量要准,如果每个孔内加的一抗、二抗试剂的量不一样结果变化很大,并且一、二抗的浓度也很重要,还有终止也最好用新近配的,否则终止后测定时数据会随时间的延长变的很厉害
[
Last edited by xfq1212 on 2010-4-20 at 20:31
]
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3楼
2010-04-20 20:30:10
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1110rainjob
铜虫
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帖子: 113
在线: 24.1小时
虫号: 899393
注册: 2009-11-10
专业: 生物技术药物
原因很多,希望你把结果发上来大家交流一下
★ ★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-04-21 18:11
普遍的几个关键点是:包被,首先确定是不是用来检测ELISA的酶标板,其次包被液的PH值是不是碱性的;洗涤时,甩板和洗涤都应干净彻底,否则易出现本底;加抗体时,抗体的用量很重要,最好先设梯度,选择适宜的浓度。在筛选抗原抗体适宜浓度时,可以借鉴“棋盘法”,这是很经典的方法,在网上很容易搜到。希望实验顺利!
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4楼
2010-04-20 20:52:34
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