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chinosaur木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】有用昆虫病毒表达蛋白的吗，进来交流一下吧
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我用昆虫病毒表达也有2个多月了，有时候蛋白多，有时候蛋白少，也有些少少经验，与大家分享一下，也请做过的达人人分享一下自己的经验，让我们这些小虫子们能少走点弯路。 我觉得蛋白产量主要跟表达时间，病毒毒力，感染时细胞密度有关。其中，根据我的经验，感染时细胞密度是最重要的，直接影响到蛋白有和无，高和低。目前来看，我有过几次蛋白产量特别低甚至完全没有表达的情况，分析之后认为是感染时细胞密度过高导致的。一般感染时，细胞密度为1.2E6时，蛋白的产量最高，再高的话，产量会随着细胞密度的增加急剧减少，如果高于2.0E6，就基本没有表达了。另外如果细胞密度太小，也不行。Invitrogen的说明书上说过，细胞密度低于0.5E6就不能进入对数期生长了。我的经验是低于1.0E6蛋白产量就会迅速减少，因为收蛋白时细胞就不多。 病毒毒力我没有做过空斑实验，就是直接用不同感染比例去测试。结果发现，1:1000,1:500,1:200,1:100,蛋白产量的差别都不大，但1:3000和1:50就不行了，也就是说可选范围其实蛮大的。 感染时间我试过24小时，48小时，53小时，60小时，72小时，84小时，90小时，96小时。其中48小时以下基本没什么蛋白，48小时到60小时还是有蛋白的，但是产量较小，从72小时就有较高的产量，而90小时达到最高值，96小时又迅速减少。 另外，我用的事SF9细胞，培养基事Hyclone的SFX-insect，加5%的NBCS(biowest). 经测试，我的蛋白在HIGH FIVE里产量较低，所以一直用SF9，但一直觉得这是一件很奇怪的事情。 好了，虽然每种蛋白的情况都不一样，但总会有一些规律是可以寻找的，请各位达人也分享一下经验吧 |
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 昆虫细胞表达系统 |
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