| 查看: 500 | 回复: 0 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
chinosaur木虫 (正式写手)
求购IQ卡
|
[交流]
【求助/交流】有用昆虫病毒表达蛋白的吗，进来交流一下吧
|
|||
|
我用昆虫病毒表达也有2个多月了，有时候蛋白多，有时候蛋白少，也有些少少经验，与大家分享一下，也请做过的达人人分享一下自己的经验，让我们这些小虫子们能少走点弯路。 我觉得蛋白产量主要跟表达时间，病毒毒力，感染时细胞密度有关。其中，根据我的经验，感染时细胞密度是最重要的，直接影响到蛋白有和无，高和低。目前来看，我有过几次蛋白产量特别低甚至完全没有表达的情况，分析之后认为是感染时细胞密度过高导致的。一般感染时，细胞密度为1.2E6时，蛋白的产量最高，再高的话，产量会随着细胞密度的增加急剧减少，如果高于2.0E6，就基本没有表达了。另外如果细胞密度太小，也不行。Invitrogen的说明书上说过，细胞密度低于0.5E6就不能进入对数期生长了。我的经验是低于1.0E6蛋白产量就会迅速减少，因为收蛋白时细胞就不多。 病毒毒力我没有做过空斑实验，就是直接用不同感染比例去测试。结果发现，1:1000,1:500,1:200,1:100,蛋白产量的差别都不大，但1:3000和1:50就不行了，也就是说可选范围其实蛮大的。 感染时间我试过24小时，48小时，53小时，60小时，72小时，84小时，90小时，96小时。其中48小时以下基本没什么蛋白，48小时到60小时还是有蛋白的，但是产量较小，从72小时就有较高的产量，而90小时达到最高值，96小时又迅速减少。 另外，我用的事SF9细胞，培养基事Hyclone的SFX-insect，加5%的NBCS(biowest). 经测试，我的蛋白在HIGH FIVE里产量较低，所以一直用SF9，但一直觉得这是一件很奇怪的事情。 好了，虽然每种蛋白的情况都不一样，但总会有一些规律是可以寻找的，请各位达人也分享一下经验吧 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 昆虫细胞表达系统 |
» 猜你喜欢
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有101人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
