| 查看: 1779 | 回复: 11 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】RNA提不出来，万分火急！ 已有11人参与
|
||||
|
大家好，最近一直在用Trizol法提取大肠杆菌总RNA，前几次提取的结果跑电泳只有一条带，应该是5S，特别亮。最近几次在提取过程中将步骤中需要涡旋震荡的均改为轻轻的颠倒混匀，结果有所改善，电泳图上能看到三条带，但23S和16S很弱，5S还是特别亮。如果提的好的话，应该是23S最亮，是16S的2倍亮度，而5S最弱。这应该是降解了吧，可该注意的事项都注意了，还是不行。哎，很着急啊，总RNA提不出来，实验就没法进行。大家多提宝贵意见啊！期待回复。我的操作步骤及电泳图如下： 过夜培养的E.coli O157: H7菌株，1: 100接种于LB培养液，37℃，200rpm振摇培养5h。 取1mL菌液，离心之后，倾出上清，将沉淀的菌体重悬浮于1ml Trizol，混匀，室温孵育5min。 加200μl氯仿，手动振摇15s混匀，室温孵育2~3min后，12000×g，15min，4℃离心。 从上层液中转移出400~600μl无色水相至新离心管中，加异丙醇约500μl，颠倒混匀以沉淀RNA，室温孵育10min后，15000×g，10min，4℃离心。 小心倾去上清，用1ml 75%乙醇重悬浮沉淀，颠倒混匀，7500×g，5min，4℃离心。 倾出上清，风干RNA沉淀，用40μl无RNase水重悬浮RNA沉淀。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验技术自我提高 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有153人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
zhongjue
木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3598.2
- 散金: 462
- 红花: 4
- 沙发: 9
- 帖子: 1098
- 在线: 193.9小时
- 虫号: 975893
- 注册: 2010-03-19
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
5楼2010-04-19 15:21:34
zhongy1985
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3820
- 红花: 1
- 帖子: 237
- 在线: 199.2小时
- 虫号: 982402
- 注册: 2010-03-25
- 专业: 作物分子育种
2楼2010-04-16 21:06:45
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
3楼2010-04-16 23:13:11
4楼2010-04-17 11:36:02
