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pidou213木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】关于简并性引物 已有3人参与
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用简并行引物扩出来一个片段，和预期的结果相似，然后连接T载体，转化进TOP10，蓝白斑筛选，培养，送到公司去测序，结果发现测出来的片段非常不好，和预期的片段碱基一点都不相同，请问这是怎么回事？ 如果这个兼并性引物不行的话，那再设计简并行引物岂不是一样的结果啊？？ 求助 |
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pidou213
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3楼2010-04-16 11:41:10
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4楼2010-04-16 11:43:13
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amisking(金币+3):讨论的不错！ 2010-04-16 11:53
pidou213(金币+1):好的，谢谢，只是因为已经扩增出预期片段，测序后却发现不是目的片段，所以很不明白，呵呵 2010-04-16 12:11
amisking(金币+3):讨论的不错！ 2010-04-16 11:53
pidou213(金币+1):好的，谢谢，只是因为已经扩增出预期片段，测序后却发现不是目的片段，所以很不明白，呵呵 2010-04-16 12:11
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要知道你测序对不对，首先就要比对是否含有简并引物，比如只有载体，那么说明你没有插入目的片段，测的自然是不对，另外有的时候测序信号也会异常，要看一下测序的峰图，是不是可以准确判读等，如果是双向测的，可以比对一下是否一致，这些都可以判断测序的效果。 如果测序没有问题，那么就是引物存在问题，即使是和目的片段大小一致，也不能完全确定就是想要的片段，毕竟简并引物错配率还是提高很多，还是要以测序结果为准，有的时候真正的目的片段和预期的大小也有差异，所以接近大小的片段建议都回收一下 |
5楼2010-04-16 11:52:23
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