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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何将2条单链DNA合成1条双链DNA
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yanjvfen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】如何将2条单链DNA合成1条双链DNA 已有4人参与

我在生工合成了2条单链DNA（分别装于2个EP管内，并且它们部分碱基互补），如何把它们合成1条双链DNA？本人第一次做分子实验，向各位大侠请教下！谢谢啦
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每天进步一点点
1楼 2010-04-15 19:43:55
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yanjvfen

银虫 (初入文坛)
要加反应缓冲液吗？
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每天进步一点点
3楼2010-04-15 21:56:25
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
95度，5 min；
65度，10 min；
37度，10 min；
降至室温保存于-20度。
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2楼2010-04-15 21:39:35
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这要看你的部分碱基互补的序列有多长，再设定退火温度。一般就是一个不加引物的PCR过程。最好用pfu酶进行聚合，TAQ可能出错。像二楼的可能以为你的是完全互补的两条单链，所以给你的方法是错的。
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4楼2010-04-16 00:33:30
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主的意思是说用那两条单链合成一条完整的双链吗？

能不能用PCR的方法就得看你的两条单链互补区域是不是在3‘末端了，是的话可以，不是的话你还得重新再合两条引物来扩全长。。

如果你的两条单链是完全互补的话，要杂交退火，我们一般是这样操作的：两条单链等量混在一起，PCR上95度3分钟，然后直接关机器，让机器自然缓慢降温，来杂交退火
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5楼2010-04-16 08:25:44
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