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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yanjvfen

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】如何将2条单链DNA合成1条双链DNA 已有4人参与

我在生工合成了2条单链DNA(分别装于2个EP管内,并且它们部分碱基互补),如何把它们合成1条双链DNA?本人第一次做分子实验,向各位大侠请教下!谢谢啦
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每天进步一点点
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
95度,5 min;
65度,10 min;
37度,10 min;
降至室温保存于-20度。
2楼2010-04-15 21:39:35
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yanjvfen

银虫 (初入文坛)

要加反应缓冲液吗?
每天进步一点点
3楼2010-04-15 21:56:25
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段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这要看你的部分碱基互补的序列有多长,再设定退火温度。一般就是一个不加引物的PCR过程。最好用pfu酶进行聚合,TAQ可能出错。像二楼的可能以为你的是完全互补的两条单链,所以给你的方法是错的。
4楼2010-04-16 00:33:30
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spiderboy

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主的意思是说用那两条单链合成一条完整的双链吗?

能不能用PCR的方法就得看你的两条单链互补区域是不是在3‘末端了,是的话可以,不是的话你还得重新再合两条引物来扩全长。。

如果你的两条单链是完全互补的话,要杂交退火,我们一般是这样操作的:两条单链等量混在一起,PCR上95度3分钟,然后直接关机器,让机器自然缓慢降温,来杂交退火
5楼2010-04-16 08:25:44
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