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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求过夜问题
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】求过夜问题 已有5人参与

涉及克隆操作时，划线培养和蓝白斑筛选等经常遇到过夜培养的问题，想问一下大家：你们对过夜的具体时间长度是怎么想的？是不是默认12小时？如果稍短些时间会不会有严重影响，比如2、3个小时？还有，我使用的宝生物质粒连接试剂盒，上面说明连接时间只用半小时即可，但是过夜也可以。为什么差距会这么大？如果两者皆可的话，是不是1、2、3……8、9、10个小时将连接产物取出使用都行？
PS：请深通蓝白斑培养的大虾解释下X-GAL、IPTG尤其是氨苄的有效时间，注意事项。我听说氨苄加到固体培养基后24小时就失效，需要使用时再涂一遍，可是如果不失效的话，会不会影响细菌生长？而IPTG见光分解，那么把它加到固体培养基后保存，是不是也如氨苄一样需要使用时再加入？
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不忘初心，为梦远行。
1楼 2010-04-15 13:00:45
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
leon198418029(金币+2):是行家啊！多谢！ 2010-04-15 13:23
别听试剂盒上面吹，为了保证效果，连接久一点。

氨苄青霉素抗性基因表达产物是酶，切开氨苄青霉素的酰胺环使失效，没有酶切开，不会那么容易失效。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-04-15 13:08:03
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j2

木虫 (正式写手)
我也是用的这个连的也，也是为连接时间烦
用3小时连了个2kb的，不晓得时间还可不可以再短点
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-04-15 19:27:08
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
leon198418029(金币+3):好的，多谢啦！ 2010-04-16 10:26
片段大小适中的，短于1000的，一般半个小时就够了，但是长的就最好延长时间，甚至过夜。
关于培养时间，一般要控制在12-18小时
加了氨苄的板子4度，半个月问题不太大
X-gal，IPTG最好时即用即涂
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4楼2010-04-15 21:43:55
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-04-15 19:27:08:
我也是用的这个连的也，也是为连接时间烦
用3小时连了个2kb的，不晓得时间还可不可以再短点

我觉得还是过夜吧，安排好时间
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不忘初心，为梦远行。
5楼2010-04-16 10:26:03
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zrm1983

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
氨苄加到培养基中，平板放在4度应该没有问题的，ITPG和x-gal要什么时候用什么时候涂板的，一般连接8个小时没问题，如果片段大于1000bp最好10小时以上。涂板后12-16小时可以观察结果。ITPG注意避光。
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6楼2010-04-17 10:14:59
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by zrm1983 at 2010-04-17 10:14:59:
氨苄加到培养基中，平板放在4度应该没有问题的，ITPG和x-gal要什么时候用什么时候涂板的，一般连接8个小时没问题，如果片段大于1000bp最好10小时以上。涂板后12-16小时可以观察结果。ITPG注意避光。

多谢啦！但是金币发完了，不好意思啊
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不忘初心，为梦远行。
7楼2010-04-17 11:42:53
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