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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】求过夜问题 已有5人参与

涉及克隆操作时,划线培养和蓝白斑筛选等经常遇到过夜培养的问题,想问一下大家:你们对过夜的具体时间长度是怎么想的?是不是默认12小时?如果稍短些时间会不会有严重影响,比如2、3个小时?还有,我使用的宝生物质粒连接试剂盒,上面说明连接时间只用半小时即可,但是过夜也可以。为什么差距会这么大?如果两者皆可的话,是不是1、2、3……8、9、10个小时将连接产物取出使用都行?
PS:请深通蓝白斑培养的大虾解释下X-GAL、IPTG尤其是氨苄的有效时间,注意事项。我听说氨苄加到固体培养基后24小时就失效,需要使用时再涂一遍,可是如果不失效的话,会不会影响细菌生长?而IPTG见光分解,那么把它加到固体培养基后保存,是不是也如氨苄一样需要使用时再加入?
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不忘初心,为梦远行。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

leon198418029(金币+2):是行家啊!多谢! 2010-04-15 13:23
别听试剂盒上面吹,为了保证效果,连接久一点。

氨苄青霉素抗性基因表达产物是酶,切开氨苄青霉素的酰胺环使失效,没有酶切开,不会那么容易失效。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-04-15 13:08:03
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