| 查看: 773 | 回复: 10 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
runxiaoli木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】构建载体出现的问题，请各位高手给予帮助 已有8人参与
|
||
|
各位大侠： 大家好，我最近在做载体构建，经过连接转化后挑菌，进行菌液PCR，对跑出目的条带的菌液进行质粒提取，并进行质粒PCR，也有带。可是进行双酶切的时候出现问题，所有的质粒酶切后经电泳检测皆只有一条带，无目的条带。送出菌液测序，无信号。 该载体构建实验持续2个月，期间换了好几次载体与目的片段的连接比例，都是遇到以上的情况，深切期待大家的帮忙，不胜感激。期待您的帮助。 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有113人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
saturn100
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3292.8
- 散金: 1082
- 红花: 1
- 帖子: 458
- 在线: 64.2小时
- 虫号: 499529
- 注册: 2008-02-11
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
★ ★ ★
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:55
runxiaoli(金币+1): 2010-04-15 20:54
runxiaoli(金币+1):你好，我用一个载体上的引物与我的下游引物进行质粒pcr，结果跑出的目的条带大小一致。酶切依然无结果。您觉得这种情况应该怎么办。 2010-04-15 20:55
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:55
runxiaoli(金币+1): 2010-04-15 20:54
runxiaoli(金币+1):你好，我用一个载体上的引物与我的下游引物进行质粒pcr，结果跑出的目的条带大小一致。酶切依然无结果。您觉得这种情况应该怎么办。 2010-04-15 20:55
|
检测目的片段的时候尽量不要用PCR，污染几率太高，而且就算你获得片段了，你没有测序，如何确认你的PCR产物就是目的片段， 双酶切一般比较可靠，不过之后也要进行测序的，你的结果只能说明一个问题，没有目的片段的插入， 重新换个连接酶（好的试剂盒）试试吧！ |
2楼2010-04-14 20:20:30
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
3楼2010-04-14 20:24:25
beisimai895
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4456.6
- 帖子: 231
- 在线: 191.5小时
- 虫号: 513938
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2010-04-15 11:07:27
goodwish
木虫 (正式写手)
木虫书呆子
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1483.6
- 帖子: 496
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 673634
- 注册: 2008-12-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2010-04-15 11:38:18
6楼2010-04-15 12:23:05
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
7楼2010-04-15 16:17:22
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
8楼2010-04-15 18:34:44
saturn100
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3292.8
- 散金: 1082
- 红花: 1
- 帖子: 458
- 在线: 64.2小时
- 虫号: 499529
- 注册: 2008-02-11
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
9楼2010-04-15 22:06:05
goodwish
木虫 (正式写手)
木虫书呆子
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1483.6
- 帖子: 496
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 673634
- 注册: 2008-12-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2010-04-17 23:36:16
