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magicalkl

木虫 (正式写手)

与君共勉

[交流] 【求助】问下HPLC流动相配制比例问题。。。 已有2人参与

刚入手HPLC是安捷伦1200,配四元泵,理论看了一些了。。今天打算入手了。。流动相初定为甲醇,乙腈,磷酸盐缓冲液。。。额。。柱子是C18柱。。忘记说了。。呵呵。。检测器是VWD的。。。
问题:
1.以一定比例洗脱液来洗脱比例有什么需要注意的吗?有没有什么比例限制?
2.开机稳定,跟关机洗柱子各位有什么心得吗,假如我的洗脱液是95%磷酸盐缓冲液5%乙腈?(就是大家做样前后怎么稳定跟清洗柱子的)
问题有点弱,希望大家提供点帮助,谢谢!

[ Last edited by magicalkl on 2010-4-12 at 13:27 ]
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senw

木虫 (著名写手)

小木虫忏悔者

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
happy169(金币+2):^_^ 2010-04-13 08:40
梯度可以自己调,看样品情况了,磷酸盐有个限制,如:水相为15mmol磷酸盐时乙腈流动相的比例不能超过80%,否则盐会在系统内析出来,用完后冲柱子用大比例水相冲2小时,基本能把盐冲干净,比例我一般用水:乙腈=90:10.
“自由,理性,良知”这是“人”真正应该学到的东西
2楼2010-04-12 11:38:57
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magicalkl

木虫 (正式写手)

与君共勉

引用回帖:
Originally posted by senw at 2010-04-12 11:38:57:
梯度可以自己调,看样品情况了,磷酸盐有个限制,如:水相为15mmol磷酸盐时乙腈流动相的比例不能超过80%,否则盐会在系统内析出来,用完后冲柱子用大比例水相冲2小时,基本能把盐冲干净,比例我一般用水:乙腈=90 ...

谢谢楼上分享,我做完样后能不能马上用100%水直接冲然后直接换100%乙腈呢?中间有没有必要有哥过度的梯度?
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3楼2010-04-12 11:57:12
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senw

木虫 (著名写手)

小木虫忏悔者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这要看你的柱子类型了,有的柱子不是全水相AQ柱,不能用100%水来冲,这样会导致键合相卷曲,对柱子损伤大,最好带5%~10%的乙腈来冲,冲完后再换成100%乙腈保存柱子。
“自由,理性,良知”这是“人”真正应该学到的东西
4楼2010-04-12 12:34:16
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