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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】问下HPLC流动相配制比例问题。。。
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magicalkl

木虫 (正式写手)

与君共勉

[交流] 【求助】问下HPLC流动相配制比例问题。。。 已有2人参与

刚入手HPLC是安捷伦1200，配四元泵，理论看了一些了。。今天打算入手了。。流动相初定为甲醇，乙腈，磷酸盐缓冲液。。。额。。柱子是C18柱。。忘记说了。。呵呵。。检测器是VWD的。。。
问题：
1.以一定比例洗脱液来洗脱比例有什么需要注意的吗？有没有什么比例限制？
2.开机稳定，跟关机洗柱子各位有什么心得吗，假如我的洗脱液是95%磷酸盐缓冲液5%乙腈？（就是大家做样前后怎么稳定跟清洗柱子的）
问题有点弱，希望大家提供点帮助，谢谢！

[ Last edited by magicalkl on 2010-4-12 at 13:27 ]
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1楼 2010-04-12 11:29:28
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senw

木虫 (著名写手)

小木虫忏悔者
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
happy169(金币+2):^_^ 2010-04-13 08:40
梯度可以自己调，看样品情况了，磷酸盐有个限制，如：水相为15mmol磷酸盐时乙腈流动相的比例不能超过80%，否则盐会在系统内析出来，用完后冲柱子用大比例水相冲2小时，基本能把盐冲干净，比例我一般用水：乙腈=90：10.
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“自由，理性，良知”这是“人”真正应该学到的东西
2楼2010-04-12 11:38:57
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magicalkl

木虫 (正式写手)

与君共勉
引用回帖:
Originally posted by senw at 2010-04-12 11:38:57:
梯度可以自己调，看样品情况了，磷酸盐有个限制，如：水相为15mmol磷酸盐时乙腈流动相的比例不能超过80%，否则盐会在系统内析出来，用完后冲柱子用大比例水相冲2小时，基本能把盐冲干净，比例我一般用水：乙腈=90 ...

谢谢楼上分享，我做完样后能不能马上用100%水直接冲然后直接换100%乙腈呢？中间有没有必要有哥过度的梯度？
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出售二手安捷伦不分流衬管部件号，5062-3587，有意站内，价格便宜
3楼2010-04-12 11:57:12
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senw

木虫 (著名写手)

小木虫忏悔者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这要看你的柱子类型了，有的柱子不是全水相AQ柱，不能用100%水来冲，这样会导致键合相卷曲，对柱子损伤大，最好带5%~10%的乙腈来冲，冲完后再换成100%乙腈保存柱子。
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“自由，理性，良知”这是“人”真正应该学到的东西
4楼2010-04-12 12:34:16
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