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frank345

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有关抑菌圈试验中菌种的浓度问题! 已有22人参与

请教大家:我现在做抑菌圈试验,看有的文献上说,菌种活化后,要配菌悬液啥

的,比如用生理盐水配成含菌数105  -106/ml的菌悬液怎么配呢?是不是通过浊度

和含菌量有一定的换算关系?有没有简单易行的方法呢?急啊,谢谢大家了。
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zhd7903

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主可以用最佳单的稀释平板法测定菌体浓度;
相信自己,相信未来
19楼2013-01-24 19:01:50
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unameder

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
你用什么菌啊,曾经用显微镜直接计数过,效果尚可。比较准的是梯度稀释涂布、倾倒吧,不过比较费时间,还是提前确定生长曲线什么的,确定培养条件如温度转速收菌时间,以后就用同样的方法。如果要求较严格,那就像你所说的,先确定浊度和菌密度的关系,每次用时测定浊度,查出菌密度,稀释到目标浓度。
2楼2010-04-08 16:12:18
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yushanyou12

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-06-05 09:56:27
有成熟的方法,举例说明,如下
我以前做阳性对照试验,使用的是金葡菌和大肠杆菌。就是先把金葡菌和大肠杆菌的菌种都先用营养肉汤培养一天,这里里面的活性菌的量会达到一个动态平衡,就是不断的生长和死亡。之后吸取1ML该培养液到100ml生理盐水中,制成很浓的菌悬液。再然后就对该浓菌液进行10倍递增稀释,一般稀释到10-7到-8次就是每毫升100cfu左右的菌悬液了。
至于菌液的稀释方法应该是要自己掌握的,那就是手感还与你的培养基培养温度,菌种有关。建议进行几次菌液稀释的平行实验并增强熟练度。掌握一个大概需要稀释到几次方。然后以后在真正做实验的时候,一般是实验和平板计数同时进行的,实验结果出来了,平板计数的结果也就出来了。在根据平板计数的结果来计算抑菌的效果。
另外这个方法还有一个好处就是,配置的弄菌悬液是可以在4度左右的温度下保存一周的,每次使用时每次稀释并计数。不用每次都去培养,但是越到后面效果就越差,也就是活性菌的量越小,稀释的倍数也就要相应减小。低浓度的菌液是不能保存的,只能当天使用。
呵呵,我这个方法是在药厂做阳性对照试验时用的,也用于药物的抑菌验证,也就是限度实验方法验证。你自己做实验用的话,因为菌种的不同及其他的因素,你是要自己先做验证实验的,菌种的培养基也根据你的菌种要求选择,当然验证实验无论什么时候也都是必须的。该方法颇为有效,可做参考 。
今夜的寂寞,让我如此美丽。
3楼2010-04-08 16:14:38
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zhaolw

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
你可以将菌种活化后,挑去单菌落到液体培养基中培养,如果是普通的哺乳动物的菌一般不要超过24h,如果有恒温摇床时间要适当缩短,浓度就能达到9-10次方。将菌液进行计数,可以才用浊度计进行计数,或者用比浊管,如果没有上述工具可以进行梯度稀释,之后可以用血球计数板在显微镜下计数,或者进行平板涂布,进行平板计数。确定数量级后,可以采用培养液或者生理盐水将菌液稀释到你所需要的浓度。
4楼2010-04-08 16:43:06
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